Prácticas glucolisis

GRUPO 1F



DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE AMINOÁCIDOS EN PRESENCIA DE FORMALDEHÍO




OBJETIVO


El principal objetivo de esta práctica será la determinación de aminoácidos en presencia de formaldehído, es decir, la cantidad de nitrógeno aminoamoniacal de una muestra. La realizaremos por el método de Sörensen que valora en bloque el nitrógeno aminoamoniacal. (20% denitrógeno amínico y 80% de nitrogeno amoniacal).


FUNDAMENTOS


Emplearemos una característica propia de los aminoácidos: su capacidad bipolar.
[pic]
Los aminoácidos, en función del pH del medio en el que se encuentren, y de acuerdo con los pKas característicos de cada grupo funcional, irán hidrolizándose, es decir soltando H+ al medio. De este modo, el aminoácido podráencontrarse en 3 estados:
a) Catiónico: todos los grupos reducidos ( -COOH y -NH3+); aa+

b) Zwitterion: hidrolizado el primer grupo funcional carboxilo (-COOH- y –NH3+); aa±

c) Aniónico: hidrolizados ambos grupos (-COOH- y NH2)

Suponiendo en este caso que el radical –R carece de grupos hidrolizables que pudieran interferir en el aporte de H+ al medio.
El primer paso trata depasar el aminoácido a forma aniónica, es decir, aumentar el pH del medio con sosa (NaOH) para desplazar la reacción arriba comentada hacia la derecha. Para determinar el grado de desplazamiento empleamos un marcador (fenolftaleína) que vira a rosa cuando el pH es básico.
De este modo, los grupos hidroxilo (-OH) de la sosa reaccionarán con los H+ desprendidos del grupo carboxilo del aminoácido y deeste modo, no interferirán en el recuento final.
Para asegurar la persistencia de la forma aniónica aminoacídica emplearemos formaldehído, compuesto afín por la forma aa-. En este punto, se llega a dos problemas:


1) El formaldehído baja el pH (por lo que será necesario volver a ajustar con NaOH) y 2) reacciona con el agua soltando H+ al medio.


Para ser conscientes de lacantidad de H+ aportados por el formol (ácido fórmico en disolución) prepararemos aparte una valoración testigo, en la que solo tendremos agua, formol y fenolftaleína e iremos titulando con NaOH para calcular la cantidad de H+ neutralizados y por tanto aportados por el ácido.
Del mismo modo, bloquearemos el aporte de H+ que el agua pudiera aportar por su reacción con el dióxido de carbonoatmosférico, convirtiéndose en H2CO3, e hidrolizándose este como HCO3 – por la reacción:


H 2O + CO 2 H2CO3 HCO3-




Para ello herviremos el agua y la taparemos, evitando así el contacto con el aire.
Dado que nuestro método de conocer la cantidad de H+ que hay en juego en la preparación es mediante la titulación con NaOH,necesitamos conocer exactamente la concentración de la base, de modo que la haremos reaccionar con el ácido oxálico, patrón primario, de concentración 0,1 M.








METODOLOGÍA



En primer lugar preparamos una solución de hidróxido sódico 0,1 N. En este caso va a coincidir la normalidad con molaridad, por tanto, podemos decir que prepararemos una solución de hidróxido sódico0,1 M.


Realizaremos los cálculos para preparar la solución. Prepararemos una solución de 0,1 M de hidróxido sódico con un volumen de 0,5 ml. Ya que en cada valoración hay que repetir 3 veces, y así y obtendremos un error menor.


M x V = nº de moles n x PM = nº de gramos
0,1 x 0,5 = 0,05 moles 0,05 x 40 = 2 gramos


Posteriormente en unvaso de precipitado herviremos 200 ml de agua destilada, y de este modo eliminaremos los protones que captan por su contacto con el agua. Una vez hervida la taparemos con plástico y así evitaremos el intercambio de protones.

Para determinar la concentración de la solución de NaOH la titularemos con ácido oxálico (sustancia patrón tipo primario). En un erlenmeyer añadiremos 10 ml de ácido...