Pr ctica 7

Estructura y función celular 2
Práctica 7. Obtención y determinación cuantitativa del DNA
Integrantes:

RESUMEN
En este experimento se extrajo DNA de hígado de pollo fresco y después se hizo un análisis cuantitativo para saber la cantidad de DNA que había presente en la muestra. Se utilizaron varios reactivos como alcohol etílico frio, dodecil sulfato de sodio (SDS), difenilamina, NaCl al 2M asícomo una solución patrón de DNA. La parte de la extracción de DNA se hizo en un baño de hielo mientras que para la cuantificación se tenían ya a temperatura ambiente, con excepción del momento en el que se incubaron en un baño de agua hirviendo por 10 minutos. Se midieron todos los tubos en un espectrofotómetro a una absorbancia de 590 nm de longitud de onda y se usó como blanco el tubo númerouno.

INTRODUCCIÓN
El DNA fue descubierto en el año 1869. Friedrich Miescher trabajó con glóbulos blancos para obtener núcleos. Cuando se trataron con ácido clorhídrico, se formó un precipitado que contenía carbono, hidrogeno, oxígeno y un alto porcentaje de fosforo. Se le llamó “nucleina” aunque después se le cambió el nombre a ácido nucleico cuando se supo que era fuertemente acido (Horton,2008).
El DNA es un polímero lineal largo, que es llamado ácido nucleico, y contiene información que puede ser transmitida de una generación a la siguiente. Esta macromolécula está formada por un gran número de nucleótidos unidos, cada uno de ellos compuesto por un azúcar, un grupo fosfato y una base (Horton, 2008).
La información genética esta almacenada en la secuencia de las bases dispuestas a lolargo de una cadena del ácido nucleico. La molécula de DNA adopta la forma de doble hélice, una estructura helicoidal constituida por dos hebras complementarias de ácidos nucleicos. Dos de las bases son derivados de la purina: la adenina (A) y guanina (G), y dos derivan de la pirimidina: citosina (C) y timina (T). La adenina se une con la timina y la citosina con la guanina (Berg, 2012).
Laextracción consiste en el aislamiento y purificación de moléculas de DNA y se basa en las características fisicoquímicas de la molécula. Los grupos fosfato están cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al DNA una carga neta negativa y lo hace altamente polar, características que son aprovechadas para su extracción. Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a sucarga negativa, lo que permite disolver al DNA en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la molécula. Pero, en presencia de etanol, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los grupos fosfato. Bajo estas condiciones se favorece la unión con cationes como Na+ que reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que el DNA precipite (Falcón yValera, 2007)
. La extracción de DNA combina procesos químicos, físicos y mecánicos e incluye básicamente tres pasos:
1. Lisis celular
2. Eliminación de proteínas
3. Precipitación y limpieza del DNA

OBJETIVO GENERAL.
Extraer el ácido desoxirribonucleico a partir de un tejido animal y determinar su identificación cuantitativamente.
OBJETIVOS PARTICULARES.
Extraer el DNA a partir de un tejidoanimal.
Determinar la cantidad de DNA extraído.
HIPÓTESIS.
Si, el Ácido Desoxirribonucleico (DNA) se encuentra resguardado en el núcleo de cada célula, sea animal o vegetal, significa que lo podemos extraer de cualquier tejido del organismo para ser estudiado e incluso poder cuantificarlo por medio de un espectrofotómetro.
MATERIAL Y EQUIPO.
Material por equipo
2 Morteros con pistilo.
1 Bisturí
1Embudo.
1 Probeta de 100 mL.
2 Vasos de precipitados de 250 mL.
1 Pipeta Pasteur.
1 Centrífuga.
2 Tubos de centrífuga de 50 mL.
1 Piceta con agua destilada.
7 Tubos de ensayo de 16 x 150 mm.
1 Pipeta graduada de 5 mL.
1 Pipeta graduada de 10 mL.
1 Pipeta graduada de 2 mL.
1 Gradilla.
1 Palangana con hielo.
1 Balanza de dos platos.
1 Espectrofotómetro.
2 Celdas para espectrofotómetro.

Material...