Practicas De Microbiologia

PRACTICA 1 CUENTA DE BACTERIAS MESOFILICAS AEROBIAS (CUENTA MESOFILICA VIABLE)

INTRODUCCIÓN El recuento de microorganismos mesófilos aeróbicos, conocido también como recuento de placas aeróbicas (APC), es el método más usual para la estimación del número de microorganismos viables en alimentos, aunque frecuentemente es usado mal. El APC no mide el total de la población de bacterias en unamuestra de comida, sino la fracción de la flora microbiana que es capaz de producir colonias en el medio de cultivo bajo las condiciones predominantes en la incubación de la placa. El asegurar la calidad microbiológica de los alimentos es de esencial importancia, ya que éstos, por sus condiciones de elaboración y manejo, pueden convertirse en vectores de enfermedades causadas por microorganismospatógenos. La NOM-092-SSA1-1994 establece la metodología para el recuento de microorganismos mesofílicos aerobios y así, evaluar de alguna manera la inocuidad de un alimento. Esta técnica es de utilidad en productos fresco-enfriados, congelados, precocidos o alimentos preparados. Las células bacterianas individuales, transferidas a la placa con el diluyente, se multiplican normalmente durante laincubación. Así puede hacerse una estimación del número total de células viables (es decir, células capaces de crecer en el medio de recuperación) en la dilución sembrada, calculando después de la incubación el recuento del número total de colonias bacterianas que se desarrollan; naturalmente en las condiciones aerobias normales crecerán las aerobias obligadas y las aerobias facultativas. Lastemperaturas de incubación seleccionadas dependen del alimento que va a examinarse. Las temperaturas corrientemente utilizadas son: 55°c para las termófilas, 35-37°c par las mesofilas y 20-30°c par muchas bacterias alterantes. Mientras la ultima temperatura es conveniente para las bacterias psicrotrofas y también para muchas mesofilas, para una estimación mas exactas de las psicrotrofas se utilizan a vecestemperaturas más bajas (por ejemplo., 5°c); debe de recordarse siempre que ninguna temperatura de incubación incluye por completo a todos los microorganismos de otro grupo.

OBJETIVO Determinar la carga microbiana mesofilicas viable presente en un alimento (fresco o procesado), para verificar el grado de contaminación de la muestra problema.

MATERIAL

4 frascos Alcohol Algodón Salsa cruda 1matraz 1 pipeta 1oml 4 cajas petri Agar nutritivo

500ml de agua destilada Autoclave (P/esterilizar) Papel aluminio Campana Cerillos

Cuenta colonias

METODOLOGÍA 1. La muestra se homogeneíza adecuadamente ya sea solida o liquida evitando contaminación externa. 2. Se pesa la muestra (10ml), posteriormente suspenderlo en 90ml de solución. 3. Agitar constantemente la mezcla hasta incorporarlorespectivamente ocupando el material estéril. 4. De acuerdo a la mezcla que se obtiene, tomar 10ml y pasarlo al segundo frasco (10−2), agitarlo y tomar nuevamente otros 10ml y colocarlo al siguiente frasco (10−3), y nuevamente agitarlo así sucesivamente hasta llegar al frasco 4. 5. De las diluciones preparadas ocupar solo las 2 últimas, inocular las cajas petri, con un mililitro de cada dilución,2 cajas por cada dilución. 6. Agregar 20ml de medio de cultivo fundido a cada caja y homogeneizar adecuadamente con movimientos rotatorios hacia ambos lados apoyando la caja sobre la mesa, procurando no salpicar la tapa de la misma ni los bordes de la caja.

7. Se incuban las 4 cajas en posición invertida durante 24- 48 (±) horas a 35°c (±). 8. Contar todas las colonias desarrolladasincluyendo las puntiformes que se definan como colonias. 9. Obtener el número de bacterias por gramo (o mililitro), multiplicando la media aritmética de las colonias contadas en las cajas seleccionadas, por el inverso de la dilución correspondiente.

AGAR NUTRITIVO (para uso general en Bacteriología) Para 1000ml Peptona de gelatina Extracto de carne Agar pH final 5.0g 3.0g 15.0g 6.8± 0.2

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