Preparacion de medios de cultivo, soluciones y disoluciones

Práctica 8
Prepara medios de cultivo, soluciones y diluciones

Propósito:
Formulará y preparara medios de cultivo, soluciones y diluciones mediante los procedimientos y técnicas establecidas para emplearlos en la identificación de microorganismos presentes en un alimento mediante un análisis microbiológico

Materiales:
º 5 pipetas de 1ml
º 10 cajas petri
º Probeta
º Matrazerlenmeyer de 500ml
º Matraz erlenmeyer de 250ml
º Vaso de precipitado de 250ml
º 3 tubos de dilución con rosca
º 3 Frascos de dilución
º 2 Mecheros
º Papel aluminio
º Algodón
º Alcohol
º Cinta testigo
º Varilla de vidrio
º Tela de asbesto
º Tripie
º Balanza granataria
ª Estufa
º Asa bacteriológica
ª puente deslizador

Medidas de seguridad
Usar bata de laboratorio
Usar cubrebovaspara sembrar para no contaminar
Tener el área esterilizada con fenol y tener los mecheros prendidos
En caso de que se derrame algo limpiar inmediatamente
Etiquetar el material
No se debe pipetear con la boca
Tener el cabello recogido
No llevar pulseras aretes anillos
Lavar y secar el material correctamente

Introducción:
Medios de cultivo en microbiología
Para que las bacteriascrezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientescomplejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. La base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimasexcepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.
Medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de losmicroorganismos que ayuden a identificarlos..
También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria delas bacterias Gram-positivas).
 
Condiciones generales para el cultivo de microorganismos
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han deestar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaban la pérdida de losfactores nutritivos lábiles.
Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes...