preparacion de muestras

PREPARACION DE MUESTRAS
5.1 Introducción
Hay muestras que pueden ser cultivadas o sometidas a pruebas de identificación tal y como se reciben en el laboratorio. Sin embargo, muchas otras deben ser preparadas (modificadas) antes del análisis microbiológico. Esto sucede cuando se presenta una de estas situaciones:
a. La muestra es sólida o pastosa y se hace necesario licuarla.
b. La muestracontiene una elevada carga de bacterias y hay que diluirla.
A continuación estudiaremos las técnicas utilizadas en cada una de estas situaciones, pero antes tenemos que advertir que en las operaciones de preparación de muestras hay que guardar todas las reglas de asepsia que permitan evitar la contaminación de la muestra.
5.2 Muestras sólidas o pastosas que es necesario licuar.
En el análisismicrobiológico de alimentos sólidos o de elevada viscosidad es necesario transformar la muestra en una suspensión líquida que contenga los microorganismos repartidos de forma homogénea.
Esto se consigue agregando un volumen medido de diluyente estéril a una cantidad pesada de muestra sólida y utilizando después algún procedimiento de trituración y homogeneización.
Procedimiento.
1 Separación de lamuestra analítica.
Llamamos muestra analítica a la porción de la muestra total (la cantidad llevada al laboratorio) que va a ser usada en el análisis. El resto de la muestra, utilizada como reserva, no es muestra analítica.
La cantidad de muestra analítica tomada para homogeneizarla debe ser suficientemente grande como para que sea representativa, como ya se mencionó antes. En algunassituaciones la cantidad de muestra a homogeneizar está establecida por la legislación sanitaria. Cuando el alimento está formado por distintos componentes (por ejemplo: una lata de cocido que contiene garbanzos, caldo y trozos de carne), la muestra analítica debe contener todos los componentes de la muestra completa y además mantener las mismas proporciones.
2 Pesada de la muestra.
Se hará en condicionesasépticas. Puede operarse de dos formas:
a) Se pesa la cantidad exacta de muestra y después se agrega un volumen previamente medido de diluyente.
b) Cuando resulta difícil pesar una cantidad exacta de muestra, se pesa una cantidad aproximada y después se mide el diluyente necesario en una probeta estéril.
3 Diluyente.
La principal característica que debe tener un diluyente es no producirmodificaciones cualitativas ni cuantitativas en la flora de la muestra, es decir, debe mantener lo más fielmente posible la flora de la muestra sin suprimirla ni favorecer su desarrollo. En microbiología alimentaria se utilizan varios diluyentes.
Entre los más usados se encuentran:
Agua de Triptona con NACL
Disolución de Ringer 1/4
Agua de Peptona Tamponada.
Solución Reguladora de Fosfatos.
Elmismo diluyente empleado en preparar la suspensión madre es el empleado en preparar la serie de diluciones decimales.
4. Homogeneización de la muestra.
En la homogenización hay que evitar la destrucción de los gérmenes por rotura de su membrana o por calentamiento excesivo. Además de la perfecta trituración de la muestra es necesario obtener una mezcla homogénea que tenga una distribuciónuniforme de los gérmenes y de sus toxinas. Hay varios tipos de homogenizadores y dentro de cada tipo puede haberlos de capacidades diversas:
a. Homogeneizadores de jarra: consisten en un vaso de vidrio o acero con una hélice en su base que funciona cuando se acopla a un motor.
b. Homogeneizadores de vástago con hélice: el vástago se introduce en un vaso con la mezcla que se va homogeneizar. Funcionacomo una batidora clásica de cocina.
Estos dos tipos de homogeneizadores tienen el inconveniente de que necesitan una limpieza exhaustiva y una esterilización antes de cada homogeneización. Esto supone un engorro. Otro inconveniente es que producen aerosoles que pueden contener microorganismos patógenos. Además, por el tipo de homogenización tan agresiva que realizan, pueden destruir los...