Preparacion y dilucion de muestras

| CONTROL DE CALIDAD | CÓDIGO: INO-AC-01 |
| PREPARACION Y DILUCION DE MUESTRASPARA ANALISIS MICROBIOLOGICO | FECHA DE EFECTIVIDAD:Enero 5 de 2011 |
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1.-Objetivo
Preparar muestras representativas obtenidas ya sea de materias primas, granel o producto terminado y hacer las diluciones decimales adecuadas para la inoculación de medios decultivo, para efectuar su análisis microbiológico.
2.-Alcance
Es aplicable para el laboratorio de Microbiología del área de Control de Calidad.
3.- Definiciones
Dilución primaria, es la solución, suspensión o emulsión obtenida después de pesar o medir una cantidad del producto bajo examen y mezclarla con una cantidad de nueve veces en proporción de diluyente.
Diluciones decimales adicionales, lassuspensiones o soluciones obtenidas al mezclar un determinado volumen de la dilución primaria con un volumen de nueve veces un diluyente y que por repetición de esta operación con cada dilución así preparada, se obtiene la serie de diluciones decimales adecuadas para la inoculación de medios de cultivo.
4.- Referencias
4.1 Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994, Bienes y servicios.Preparación y dilución de muestras para su análisis microbiológico.
4.2 Norma Oficial Mexicana NOM-089-SSA1-1994, Bienes y servicios. Métodos para la determinación del contenido microbiano en productos de belleza.
4.3 Secretaría de Salud. 1988. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. 9a Ed. México, D.F.
5.- Material y Equipo
5.1 Materiales
Buretas graduadas de 100 ml, y de 250 ml
Vasos deprecipitado de 250 y 500 ml
Frascos de vidrio de 250 ml con tapón de rosca.
Tubos de 16 x 150 mm con tapón de rosca.
Pipetas bacteriológicas para distribuir 10 y 1 ml (o si es necesario de 1 ml y 5 ml), con tapón de algodón. Las pipetas pueden ser graduadas en volúmenes iguales a una décima de su volumen total.
Utensilios de acero inoxidable esterilizables para la obtención de muestras: Espátulas,pinzas, tijeras, cucharas, cucharones, etc.
Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio deberán esterilizarse en la
Autoclave, a 121 ± 1,0°C y 15 lb/pul2, durante 15 minutos como mínimo.
El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas.
No debe usarse material de vidrio dañado poresterilización repetida.
5.2 Aparatos e instrumentos
Autoclave vertical con termómetro y manómetro, calibrada contra termopares.
Balanza digital Calibrada con sensibilidad de 0,1 g y capacidad máxima de 2 000 g.
Campana de Flujo laminar, con filtro HEPA de 0,1 um.
Refrigerador con capacidad suficiente y temperatura constante menor a 7°C.
6.- Método
6.1 Reactivos
Los reactivos que a continuación semencionan deben ser grado analítico. Cuando se indique agua debe entenderse como agua destilada.
6.1.1 Preparación de reactivos
6.1.1.1 Solución de hidróxido de sodio 1,0 N
Hidróxido de sodio 4,0 g
Agua 100,0 ml

Disolver el hidróxido de sodio lentamente y aforar llevando a 100 ml con agua destilada.
Envasar en frasco de plástico, rotulando con una etiqueta de identificación con todos losdatos de la preparación.
6.1.1.2 Solución de etanol 70% y Acido clorhidrico al 1% v/v
Etanol 70,0 ml
Acido Clorhidrido 1,0 ml
Agua c.b.p. 100,0 ml
Mezclar el etanol y el HCl, aforar a 100 ml con agua destilada.
Envasar en atomizadores y pizetas de plastico, rotulando los envases con una etiqueta de identificación con todos los datos de la preparación.


6.1.2. Soluciones diluyentes6.1.2.1. Agua peptonada
Peptona 1,0 g
Cloruro de sodio 8,5 g
Agua 1,0 L

Pesar las cantidades de cada reactivo por separado y disolver los componentes en un litro de agua destilada
Ajustar el pH a 7 ± 0,1 con la solución de hidróxido de sodio 1,0 N.
Distribuir en frascos de tapa rosca con 90 ml y tubos de tapa rosca con 9 ml
Esterilizar en Autoclave a 121 ± 1,0°C durante 15 minutos....