Preparacion y esterilizacion para material de laboratorio

PRÁCTICA # 2
PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL Y MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVO
Que el alumno conozca los principios generales de las técnicas de esterilización de materiales de vidrio y medios de cultivo de uso común en Microbiología. Observará el efecto de las condiciones de asepsia en el control de la contaminación microbiana en el laboratorio.

INTRODUCCIÓN
Los microorganismoscomo otros seres vivos, son susceptibles a los cambios de condiciones ambientales y en la medida en que se han podido adaptar a estos cambios, se han distribuido en una gran diversidad de hábitats incluyendo los de condiciones extremas sobre todo de tipo físico y químico.
Se han desarrollado y aplicado diversos procesos de desinfección y esterilización para limitar su presencia o eliminarlos. Laesterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo y que asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente, mientras que la desinfección es un proceso que solamente elimina formas vegetativas de los microorganismos. La esterilización con calor seco y húmedo son los procedimientos de mayor utilización en Microbiología. El calor seco desnaturaliza las enzimas y destruyea los microorganismos por oxidación, por ejemplo al ponerlos directamente a la flama de un mechero o en horno a 150-180 ºC durante 2 horas. Estos métodos se aplican principalmente en la esterilización de asas de inoculación y todo tipo de material de vidrio y quirúrgico.
Los procesos con calor húmedo se aplica para esterilizar medios de cultivo, soluciones y cultivos bacterianos que se desechan,el más recomendable es el autoclave en el que se utiliza vapor de agua a presión para alcanzar temperaturas de 121ºC. El material se deja a esta temperatura durante 15 minutos para asegurarse de la destrucción de endosporas, que son las estructuras bacterianas más resistentes al calor.
Cuando se requiere esterilizar diferentes materiales sensibles al calor como soluciones de vitaminas,aminoácidos etc. Se esterilizan por filtración en membranas estériles de 0.2 micras de diámetro y para el caso de materiales plásticos es recomendable el uso de gases como oxido de etileno o con radiaciones gamma. Las superficies generalmente se desinfectan con radiaciones U.V. o compuestos químicos en forma líquida como: fenoles, compuestos cuaternarios de amonio (alquildimetil bencilarnonio),formaldehído, alcoholes, halógenos y detergentes.
Cada uno de estos procedimientos tienen ventajas y desventajas de uso, los sistemas de filtrado son muy eficientes y rápidos para la esterilización peso solo aplican en pequeños volúmenes. Los fenoles y compuestos cuaternarios de amonio son muy efectivos para la desinfección de superficies pero son muy corrosivos. Los detergentes y los alcoholes tienenactividad limitada contra esporas bacterianas y algunos virus por lo que solo son desinfectantes.

MATERIALES

7 tubos de ensaye de 16x 150 mm con tapón
3 tubos de ensaye de 16x 150 mm
9 cajas Petri de cristal
3 pipetas de 1 ó 2 mL
3 pipetas de 10 mL
1 pipetas Pasteur
4 matraces Erlenmeyer de 250 mL
1 parrilla con calentamiento
1 autoclave
1 potenciómetro
1 horno de calor seco
1 mecheroFischer ó Bunsen
1 incubadora a 35 oC
1 isopo estéril, algodón y gasa
Papel manila ó estraza para envolver
Caldo nutritivo
Medio de agar nutritivo
Medio de agar papa dextrosa PDA
Medio mínimo de sales
Soluciones amortiguadoras pH 4 y 7.

Preparación del material de vidrio y medios de cultivo

1. Lavar perfectamente las cajas Petri y pipetas con escobillon y detergente. Enguagar conabundante agua corriente.
2. Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con agua destilada con una piceta, por las paredes interiores. Dejar escurrir el material sobre una toalla o papel de envoltura. No debe secar el material por ningún otro medio.
3. Una vez seco el material, se procederá a envolver las cajas Petri y pipetas con papel de estraza, Para los tubos y matraces se...