Problemas en geles de poliacrilamida

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  • Publicado : 8 de noviembre de 2010
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GUIA DE PROBLEMAS EN LOS GELES DE POLIACRILAMIDA
Los geles de poliacrilamida presentan muchas veces errores, a continuación se describen muchos de esos errores y cuales son los causales para quepresenten esto:
Las concentraciones en los geles de las diferentes soluciones con las que se preparan no siempre son las mismas, es aquí donde empiezan a existir variaciones en la obtención deresultados, por lo cual se recomienda que al realizar un gel se tenga la mayor precisión posible así se disminuirán errores en este.
PROBLEMA | CAUSA | SOLUCION |
1. EFECTO SONRISA- patrón de bandasse curva hacia arriba a ambos lados del gel. | En el centro de gel hay mas calor y correr más que cualquiera de los extremos de este. | El tampón no se mezcla bien o en la cámara superior estademasiado concentrado. Homogenizar la mezcla, sobre todo cuando hay que diluir un stock 5x o 10x |
| Condiciones excesivas en la fuente de poder | Disminuir el ajuste en la potencia de 200V a 150 V orellenar la cámara baja con una precisión de 1 cm de la parte superior de las agujas cortas. |
2. RAYAS VERTICALES EN LAS PROTEINAS | Sobrecarga en la muestra | Diluir las muestras, de formaselectiva eliminar la proteína predominante en la muestra, o reducir el Voltaje alrededor del 25% para reducir al mínimo las rayas |
| Precipitación de la muestra | Centrifugar la muestra antesde añadir el tampón SDS o disminuir el %T del gel. |
| | La proporción de SDS a la proteína debe ser suficiente para cubrir cada molécula de proteína con esta, por lo general de 1,4:1. Se puederequerir más de SDS para algunas muestras de proteínas de membrana. |
3.BANDA DE PROPAGACION LATERAL | Difusión de los pozos antes de la puesta en marcha del actual. | Minimizar el tiempo entrela aplicación y puesta en marcha de la muestra. |
| Fuerza iónica de la muestra inferior a la del gel | Uso de nombras en las muestras del gel |
4. BANDAS SESGADAS O DISTORCIONADAS |...
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