Procesos bioquimicos
Páginas: 9 (2111 palabras)
Publicado: 9 de octubre de 2010
Universidad del Bío-Bío
Facultad de Cs. Salud y de los Alimentos
Escuela de ingeniería en Alimentos
INFORME N°2
“CURVAS DE CALIBRADO”
(Concentración Celular)
Nombres : Merybeth Aguilera
Patricio Orellana
Profesor : Dr. María Pía GianelliProfesor Lab : Sr. Luis Mojica
Asignatura : Ingeniería de Procesos Bioquímicos
Fecha entrega : 24/09/2009
RESUMEN
Los métodos directos de cuantificación de microorganismos permiten establecer la población total de microorganismos existentes. Tienenla ventaja de ser rápidos aunque no es posible diferenciar a las células vivas de las muertas. Entre estos métodos tenemos la turbidimetria y el conteo de células.
En el presente trabajo, se hizo uso de ambos métodos con el fin de realizar curvas de calibrado para determinar la concentración celular y realizar correlaciones entre concentración celular y numero de células por unidad de volumen.La construcción de una curva de calibración para determinar la concentración celular, fue realizada a través del empleo de la turbidimetría, para esto se utilizó espectrofotómetro a una longitud de onda máxima de 550 nm. Posteriormente se tomó 1,5ml de cultivo de cada dilución. Estas fueron colocadas en tubos de ependorff, para su posterior centrifugación (3000rpm x 5min). El peso seco(contenido de sólidos) de las células se obtuvo por el secado de este volumen en una estufa a 105°C hasta peso constante. Se ha demostrado teórica y experimentalmente que la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, por lo que se puede realizar una correlación entre concentración celular y número de células.
Para obtener la relación del número de células de levadura por unidad de volumen,se realizó un recuento directo de células en microscopio, mediante el método Newbawer, utilizando para ello una determinada dilución lo cual requiere de células individuales y un medio limpio.
Finalmente, se obtuvo que en las soluciones diluidas la absorbancia es directamente proporcional al peso seco y que el número de células de un cultivo es directamente proporcional a la concentración deéste, es por eso que la dilución 1/10 contiene un menor número de células en comparación con la dilución 1/5.
INDICE
TEMA PÁGINA
Introducción __________________________________________________ 1
Objetivos __________________________________________________ 2Materiales, reactivos y equipos____________________________________ 3
Procedimiento _________________________________________________ 4
Resultados y discusiones ________________________________________ 5-7
Conclusión __________________________________________________ 8
Bibliografía __________________________________________________ 9
Anexos ycálculos_______________________________________________ 10
INTRODUCCION
En la actualidad existen diversos métodos para la determinación experimental de la concentración celular, entre ellos se encuentran: turbidimetría, peso seco y recuento del número de células.
La turbidimetria es una técnica que se basa en la dispersión de la radiación por las partículas de materia. Cuando la luz pasa a través deun medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, parte de la radiación se dispersa en todas las direcciones lo que confiere un aspecto turbio a la mezcla. La disminución de intensidad de un haz colimado, como consecuencia de la dispersión de la luz por las partículas, constituye la base de los métodos turbidimétricos. Este método es satisfactorio cuando la...
Facultad de Cs. Salud y de los Alimentos
Escuela de ingeniería en Alimentos
INFORME N°2
“CURVAS DE CALIBRADO”
(Concentración Celular)
Nombres : Merybeth Aguilera
Patricio Orellana
Profesor : Dr. María Pía GianelliProfesor Lab : Sr. Luis Mojica
Asignatura : Ingeniería de Procesos Bioquímicos
Fecha entrega : 24/09/2009
RESUMEN
Los métodos directos de cuantificación de microorganismos permiten establecer la población total de microorganismos existentes. Tienenla ventaja de ser rápidos aunque no es posible diferenciar a las células vivas de las muertas. Entre estos métodos tenemos la turbidimetria y el conteo de células.
En el presente trabajo, se hizo uso de ambos métodos con el fin de realizar curvas de calibrado para determinar la concentración celular y realizar correlaciones entre concentración celular y numero de células por unidad de volumen.La construcción de una curva de calibración para determinar la concentración celular, fue realizada a través del empleo de la turbidimetría, para esto se utilizó espectrofotómetro a una longitud de onda máxima de 550 nm. Posteriormente se tomó 1,5ml de cultivo de cada dilución. Estas fueron colocadas en tubos de ependorff, para su posterior centrifugación (3000rpm x 5min). El peso seco(contenido de sólidos) de las células se obtuvo por el secado de este volumen en una estufa a 105°C hasta peso constante. Se ha demostrado teórica y experimentalmente que la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, por lo que se puede realizar una correlación entre concentración celular y número de células.
Para obtener la relación del número de células de levadura por unidad de volumen,se realizó un recuento directo de células en microscopio, mediante el método Newbawer, utilizando para ello una determinada dilución lo cual requiere de células individuales y un medio limpio.
Finalmente, se obtuvo que en las soluciones diluidas la absorbancia es directamente proporcional al peso seco y que el número de células de un cultivo es directamente proporcional a la concentración deéste, es por eso que la dilución 1/10 contiene un menor número de células en comparación con la dilución 1/5.
INDICE
TEMA PÁGINA
Introducción __________________________________________________ 1
Objetivos __________________________________________________ 2Materiales, reactivos y equipos____________________________________ 3
Procedimiento _________________________________________________ 4
Resultados y discusiones ________________________________________ 5-7
Conclusión __________________________________________________ 8
Bibliografía __________________________________________________ 9
Anexos ycálculos_______________________________________________ 10
INTRODUCCION
En la actualidad existen diversos métodos para la determinación experimental de la concentración celular, entre ellos se encuentran: turbidimetría, peso seco y recuento del número de células.
La turbidimetria es una técnica que se basa en la dispersión de la radiación por las partículas de materia. Cuando la luz pasa a través deun medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, parte de la radiación se dispersa en todas las direcciones lo que confiere un aspecto turbio a la mezcla. La disminución de intensidad de un haz colimado, como consecuencia de la dispersión de la luz por las partículas, constituye la base de los métodos turbidimétricos. Este método es satisfactorio cuando la...
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