Proteinas

Tema 4. Proteínas: funciones biológicas y estructura primaria. Enlace peptídico. Péptidos y proteínas. Diversidad de funciones biológicas. Niveles de organización estructural de las proteínas. Separación y purificación de proteínas. Estructura primaria. Información a partir de la secuencia de aminoácidos. Proteínas homólogas. Métodos de análisis de proteínas

BIOQUÍMICA-1º de Medicina Dpto.Biología Molecular Jesús Navas

LOS AMINOÁCIDOS SE PUEDEN UNIR POR ENLACES PEPTÍDICOS

Dos aminoácidos

Eliminación de una molécula de agua

Enlace peptídico

... Formación del enlace CO-NH
Extremo amino
TEMA 4

Extremo carboxilo
Garret & Grisham , 1999 2

PEPTIDOS Y PROTEINAS
Péptido: hasta 50 aminoácidos. Oligopéptido: péptido pequeño. Polipéptido: péptido grande. Proteínasoligoméricas: formadas por subunidades idénticas llamadas protómeros. • Proteínas sencillas y conjugadas (grupo prostético)
TEMA 4

• • • •

3

SECUENCIA DE LA INSULINA DE VACA La insulina tiene dos cadenas unidas por dos puentes disulfuro. La cadena A tiene 21 aa y la B tiene 30 aa.

TEMA 4

Garret & Grisham , 1999 4

TEMA 4

5

TEMA 4

6

Clasificación de proteínas según sugrupo prostético

TEMA 4

(Lehninger, 2000) 7

Niveles de organización de las proteínas

Estruct. primaria

Estruct. secundaria

Estruct. terciaria

Estruct. cuaternaria

Aminoácidos

Hélice alfa

Cadena polipeptídica

Subunidades ensambladas

TEMA 4

(Lehninger, 2000) 8

Factores que determinan la conformación proteica
Además de la estructura primaria, las condicionesfísico-químicas del entorno: cambios en el pH, concentración salina, temperatura, otros factores ambientales. Desnaturalización es la pérdida de la conformación de una proteína. Una proteína desnaturalizada pierde su actividad biológica.
TEMA 4

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Clasificación de proteínas según su grupo prostético

TEMA 4

(Lehninger, 2000) 10

PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE PROTEÍNAS 1. Obtención delextracto crudo 2. Fraccionamiento del extracto crudo por precipitación con sulfato amónico y diálisis 3. Cromatografía en columna: • • • Por su carga: cromatografía de intercambio iónico Por su masa: cromatografía de filtración molecular Por sus propiedades biológicas: cromatografía de afinidad

4. Electroforesis en gel: • • •
TEMA 4

Electroforesis en poliacrilamida-SDS Enfoque isoeléctricoElectroforesis bidimensional
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Diálisis

TEMA 4

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Cromatografía intercambio iónico

TEMA 4

(Lehninger, 2000) 13

Cromatografía de exclusión molecular

TEMA 4

(Lehninger, 2000) 14

W

Cromatografía de afinidad

TEMA 4

(Lehninger, 2000) 15

Separación de proteínas por electroforesis en geles de poliacrilamida-SDS

TEMA 4

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Determinación de la masamolecular de una proteína por electroforesis en poliacrilamida-SDS
Patrones
TEMA 4

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Sangre: células y proteínas plasmáticas
• La sangre es un sistema de transporte y distribución de nutrientes. • Está formada por una solución acuosa que contiene moléculas de tamaño variable y diversos tipos de elementos celulares.

TEMA 4

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Plasma y suero
• Los elementos formes de la sangre seencuentran en una suspensión acuosa denominada plasma. Es el sobrenadante obtenido al centrifugar una muestra de sangre tratada con anticoagulante. • Suero: sobrenadante obtenido al centrifugar una muestra de sangre después de haber dejado que coagule. La mayoría de las determinaciones químicas se hacen en suero.
TEMA 4

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Proteínas plasmáticas
• Sintetizadas en el hígado: albúmina. •Producidas por las células plasmáticas de la médula ósea: inmunoglobulinas.

TEMA 4

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- 50% de la proteína plasmática humana - Concentración en sangre: 35-55 g/l - Pm = 66 kDa, muy soluble en agua. - A pH 7 es un polianión con 20 cargas negativas (fija muchos ligandos) - Posee hendiduras hidrófobas capaces de fijarse a ácidos grasos
TEMA 4

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PROTEINOGRAMA
• • • Proteínas totales: 6-8...