Proteinas

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  • Publicado : 24 de octubre de 2010
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Un procedimiento simple para la determinación de la concentración de la proteína en soluciones es el análisis de la proteína de Bradford que fue descrito primero por Bradford.
Una valoración de laconcentración de la proteína es esencial ser hecho rápidamente y exactamente en muchos campos del estudio de la proteína. El análisis de Bradford confía en el atascamiento del tinte Coomassie G-250azul a la proteína.
Los estudios detallados indican que el tinte libre puede existir en cuatro diversas formas iónicas para las cuales los valores del pKa sean 1.15, 1.82, y 12.4. De las tres formascargadas del tinte que predominan en la solución ácida el reactivo del análisis, las formas rojas y verdes más catiónicas tenga máximos de la absorbencia en 470 nanómetro y 650 nanómetro,respectivamente. En cambio, la forma azul más aniónica del tinte, que ata a la proteína, tiene un máximo de la absorbencia en 590 nanómetro.
Así, la cantidad de proteína puede ser estimada determinando la cantidadde tinte en la forma iónica azul. Esto es alcanzada generalmente midiendo la absorbencia de la solución en 595 nanómetro.
El tinte aparece atar lo más fácilmente posible al arginyl y a los residuoslisiles de proteínas. Esta especificidad puede llevar a la variación en la respuesta del análisis a diversas proteínas, que es la desventaja principal del método. El análisis de Bradford de la originalmuestra la variación grande en respuesta entre diversas proteínas. Varias modificaciones al método se han desarrollado para superar este problema.
Sin embargo, estos cambios dan lugar generalmente aun análisis menos robusto que sea a menudo más susceptible a interferencia por otros productos químicos. Por lo tanto, el método original ideado por Bradford sigue siendo la formulación másconveniente y más ampliamente utilizada. Dos tipos de análisis se describen aquí: el análisis estándar, que es conveniente para medir entre el µg 10 y 100 de la proteína, y el microanálisis, que detecta...
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