Prueba de coombs

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PRÁCTICA No. 9

PRUEBA DE COOMBS

OBJETIVO.

Demostrar la presencia de anticuerpos hemoagrupadores absorbidos a las células rojas en vivo (prueba directa), además de la presencia de anticuerpos absorbidos invitro.

FUNDAMENTO.

Se basa en el principio de los ateroanticuerpos contra componentes del suero humano según la descrita por Mareschi y los principios de la aglutinaciónpublicados por Landsteiner. Los eritrocitos humanos en presencia de un anticuerpos dirigido contra un antígeno que posean, pueden ser sensibilizadas para no lograr la aglutinación por la naturaleza misma del anticuerpo o el antígeno en cuestión. El suero antihumano, reaccionará contra la gamma globulina que han sensibilizado a componentes del complemente humano y propiciará la aglutinación de loseritrocitos.

INTRODUCCIÓN.

Marechi en 1908 escribió el principio de la reacción de antiglobulina. Fue hasta 1945, cuando se usó como prueba inmonohematológica por Coombs, Maurant y Race detectan anticuerpos anti Rh. En 1957 Dacie y colaboradores definieron la reacción del suero de antiglobulina con componentes de complemento humano.

El suero anti-humano, llamado suero de Coombs seprepara por medio de inyecciones repetidas a los animales con sueros humanos mezclados del grupo 0, después de eliminar hemolisinas y aglutinas no específicas se agrega al suero ácido de sodio al 0.1% como conservador. El suero deberá mantenerse entre 2° y 8°C mientras no esté en uso, para evitar su desnaturalización y contaminación.

Como lo dice su nombre, esta prueba permiteestablecer la presencia de globulinas; pero puesto que los anticuerpos son globulinas, permite encontrarlas también.

Los anticuerpos incompletos, entre ellos muchos de los que explican la eritroblastosis fetal y la anemia hemolítica adquirida, se absorben sobre la superficie de los eritrocitos, pero no los aglutinan. El suero antiglobulina humana (de Coombs) permite reconocer estosglóbulos rojos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulinicos que ya cubren su superficie, con lo cual se produce la aglutinación. Puesto que el suero contiene globulinas que neutralizan muy rápidamente los anticuerpos antigobulinas humanas (de Coombs), es evidente que para identificar los glóbulos sensibilizados es absolutamente necesario remover la totalidad del suero de los glóbulosmediante lavados repetidos (tres cuando menos) con grandes volúmenes (50 a 100 veces el volumen de los glóbulos rojos) de suero fisiológico estéril.

El suero de Coombs, es un auxiliar en el diagnóstico por lo que que se usa rutinariamente en las siguientes pruebas:

1. Prueba de compatibilidad o pruebas cruzadas.

2. Detección e identificación de anticuerpos.

3. Prueba parala variante del antígeno Rh-D llamada Du.

4. Pruebas de eritrocitos en cordón umblical a pacientes transfundidos (Coombs directo).

MATERIAL

1. Gradilla metálica

2. Tubos de Khan (13 x 75mm).

3. Tubos de hemólisis

4. Pipeta Pasteur con bulbo

5. Cronómetro

6. Termómetro de – 10°C a +110°C

7. Torundas con alcohol

8. Lancetadeshechable

APARATOS

1. Centrífuga

2. Baño maría eléctrico
MUESTRA

1. Sangre completa

2. Suero

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA: La prueba directa de Coombs se usa para demostrar la presencia de los anticuerpos que han fijado en las células del paciente in vivo, por ejemplo en la enfermedad hemolítica del recién nacido, en la anemia hemolítica adquirida, etc.PROCEDIMIENTO

1. Preparar una suspensión al 2% en solución salina normal de las células probadas.

2. Agregue dos gotas de la suspención de las células preparadas a un tubo de 13 x 75mm.

3. Lavar con solución salina y centrifuge a 3500 r.p.m. durante 1 minuto. Efectúe este lavado tres veces.

4. Después del último lavado, decante lo más posible.

5. Agregue dos gotas...
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