Pruebas bioquimicas

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PRUEBAS BIOQUIMICAS
MEDIO DE CULTIVO | PROPOSITO | INOCULACION | TratamientoPost incubacion | RESULTADOS |
| | | | POSITIVO | NEGATIVO |
Agar de Almidón | Producción de la exoenzima Amilasa | 24-48 h/ 37ºC | Yodo (2-3 gotas) | Área clara alrededor del cultivo | Color negro alrededor del cultivo |
Agar con Gelatina | Producción de la exoenzima Gelatinasa | 24-48h/ 37ºCEstocada hastael fondo | Colocar en Nevera por 30 minutos | Licuefacción de la gelatina | Solidificación |
Rojo Fenol Carbohidrato * Dextrosa * Mannitol * Lactosa * Sacarosa | Determinar si la bacteria puede utilizar, ese carbohidrato | 24-48h/ 37ºC“loop” | - | Amarillo (producción de ácidos, fermentación del carbohidrato)Puede haber producción de gas | Rojo, aumento del pH (producción desustancias alcalinas por utilización de peptonas) |
Agar de Tres azucares y Hierro (TSIA) | Ver el patrón de fermentación de la bacteria | 18-28h/ 37ºC1-estocada2

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2-estriar | - | Utilización de glucosa Rojo AmarilloUtilización de Lactosa y/o sucrosa Am AmEn ambos puede haber producción de gas y H2S (negro)| Utilización de peptonas Rojo Rojo |
SIM | 1. Determinar si la bacteria a través de Triptofanasas puede degradar el Triptófano a indol. 2. Determinar si hay producción de H2S a partir de aminoácidos azufrados 3. Determinar si la bacteria es móvil. | 24-48h/ 37ºCEstocada hasta el fondo | Para Indol: 2 a 3 gotas del reactivo de Kovac | Rojo (anillo) –presencia de indol (triptófano fue degradado).Negro (precipitado), producción de H2SDifuminación de la bacteria hacia los lados | Amarillo, la bacteria no puede degradar el triptófanoMedio de cultivo se queda igual.La bacteria sólo crece en la línea de inoculación |
Caldo MR-VPPrueba de Rojo de MetiloPrueba de Voges-Proskauer | Determinar habilidad de las bacterias para producir ácidos estables porfermentación de la glucosaDeterminar la capacidad de producir acetoina por fermentación de la glucosa | 48h/ 37ºC“loop”48h/ 37ºC“loop” | 2 a 3 gotas de Rojo de Metilo (después de los siete días)10 gotas de α naphtol5 gotas KOH 40% | Rojo, presencia de ácidos, pH 4Color rosa, presencia de acetoina | Amarillo,no producción de ácidos estables.No desarrollo de color rosa, ausencia de acetoina |Simmons Citrate | Utilización del citrato como única fuente de carbono. | 24-48h/ 37ºCEstriar | - | Azul | Verde |
Caldo de Urea | Determinar si la bacteria degrada la Urea | 48h / 37ºC“loop” | - | Rosa intenso | Medio permanece igual |
Litmus Milk | Observar diferentes reacciones metabólicas que ocurren en la leche:FermentaciónReducción del LitmusCoágulo:a. Reninab. AcidoProducción deGasProteólisisReacción Alcalina | 24-48 h/ 37ºC“loop” | ------- | RosaBlancoSuave, se mueve si se inclina el tuboDuro, se queda atascado en las paredes del tubo, si este se inclinaCoágulo rotoVioleta arriba y brown acuoso abajoVioleta | VioletaVioletaNo hay formación de coáguloNo hay formación de coáguloCoágulo intactoVioletaRosa |
Agar de Nitrato | Determinar si la bacteria tiene la capacidad de reducirnitratos a nitritos | 24-48 h/ 37ºC | 1 gota de ácido sulfanílico1 gota de α naphtilaminaPolvo de Zinc | Rojo(sin echar el polvo de zinc) | Medio permanece igual (con el polvo de zinc cambia a rojo) |
Catalasa : Agar Nutritivo | Determinar si la bacteria produce catalasa para degradar el H2O2. | | 1 gota de H2O2 a una colonia | Efervescencia | Permanece igual |

 Prueba de la Oxidasa
Elobjetivo de la prueba “Oxidasa” es buscar la presencia de la enzima Citocromo C oxidasa.
Se trata de un enzima que oxida el citocromo C de la cadena transportadora de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo C oxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a púrpura....
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