Pruebas bioquimicas

PRUEBAS BIOQUIMICAS
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos exámenes químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria alcrecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.

De la amplia variedad en pruebas bioquímicas, nosotros utilizaremos 6, las cuales son:
1. MEDIO TSI ( TRIPLE AZUCAR, HIERRO)
2. MEDIO CITRATO DE SIMMONS
3. MEDIO LIA(LISINA HIERRO AGAR)
4. MEDIO UREA
5.MEDIO FENILALANINA( AGAR FENILALANINA)
6. MEDIO MIO( MOTILIDAD, INDOL, ORNITINIA)

MEDIO TSI
TRIPLE AZUCAR Y HIERRO
Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados parael desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro desodio mantiene el balance osmótico.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
SIEMBRA
A partir de un cultivo puro, sembrar enTSI, por punción en el fondo y estriado sobre la superficie del medio.
INCUBACION
De 35 -37 C durante 24 horas.
RESULTADOS
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondorojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
INDICADOR
Rojo de fenol
ALMACENAMIENTO
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

MEDIO AGAR CITRATO DE SIMMONS
Medio utilizado parala diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactorenzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.
El metabolismo delcitrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto...