Quimica

PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES TOTALES

Prepare una serie de diluciones a partir de la solución stock de glucosa. Las concentraciones deberán ser de 300, 150, 75 y 30 µg/ml. Utilice matraces volumétricos aforados con tapón y márquelos con la concentración correspondiente.

1. Pipetee 1 ml. de cada solución estándar de glucosa y agua destilada como blanco entubos de ensayo con capacidad de 25 ml. aforados.
2. Añada 1 ml. de reactivo alcalino de Nelson.
3. Mezcle. Colóque los tubos en un baño de agua hirviendo durante 20 minutos y enfríelos al chorro de agua fría.
4. Añada 1 ml. de arsenomolibdato.
5. Mezcle bien por un períodode 5 min. (para disolver el Cu2O para reducir el aresnomolibdato).
6. Afore a 25 ml. con agua destilada y mezcle.
7.Lea la absorbancia a 520 nm.

Grafíque la absorbancia contra la concentración (µg/g). Utilice esta curva estándar para determinar la concentración de glucosa en las muestras de frutas.

PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS PARA LA DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCORES TOTALES

1.- Extraiga el jugo de la fruta asignada mediante un extractor de jugos.
2.- Diluya el jugo de la muestra con aguadestilada (1:49).
3.- Colóque 5 ml. del jugo diluido en un matraz volumétrico de 250 ml. y afore con agua destilada.

DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES TOTALES

1.- Transfiera 1 ml. del jugo diluido a un matraz volumétrico aforado de 100ml. y añada 5 ml. de reactivo de ferricianuro.
2.- Colóque los matraces en un baño de agua hirviendo por 10 minutos.
3.- Enfríe los matracesinmediatamente bajo el chorro de agua fría.
4.- Neutralice el contenido de los matraces con 10 ml. de solución de ácido sulfúrico 2N.
5.- Mezcle los contenidos de los matraces suavemente hasta que no emanen más gases.
6.- Añada 4 ml. de arsenomolibdato.
7.- Mezcle una vez más el contenido de los matraces.
8.- Afore a 100 ml. con agua destilada.
9.- Tome una celda del espectrofotómetro ytransfiera ahí el contenido de cada matraz (uno por celda).
10.- Efectúe la lectura en el espectrofotómetro a 520 nm. El blanco constará de todos los reactivos antes mencionados, excepto la muestra de jugo de fruta bajo estudio. No olvide ajustar el espectrofotómetro con agua destilada al principio.

CÁLCULOS:
A partir de la curva estándar se calcula el valor k para la determinación de azúcaresreductores totales mediante la siguiente fórmula:

k = c/a

En donde:
k = El factor por unidad de absorbancia o pendiente de la curva.
c = Concentración de azúcares reductores en gramos/100 ml.
a = Absorbancia de la solución a esa concentración.

Los valores k a diferentes concentraciones de azúcar se promedian y se designan como K. El contenido total de azúcares reductores,S, de la muestra se calcula de la fórmula:

S = K.A.D.
En donde:

S = Concentración total de azúcares reductores de la muestra en gramos/100 ml de jugo.
K = Pendiente promedio de la curva.
D = Factor de dilución.

DETERMINACIÓN DE FRUCTOSA
NOTA: Esta determinación no se realizará en esta sesión de laboratorio).

Al calentar una mezcla de glucosa y fructosa a ciertatemperatura - eg., 55°C - con el reactivo alcalino de ferricianuro, la velocidad de oxidación de la glucosa es considerablemente menor que la de fructosa. El resultado obtenido es conocido como fructosa aparente. Ésta es ligeramente más alta que el contenido real de fructosa en la muestra, la cual puede ser calculada usando las fórmulas adecuadas. El procedimiento para la determinación de esta fructosaaparente es el mismo que para el cálculo de los azúcares reductores totales, excepto que se cambia la temperatura y el período de calentamiento a 55°C por 30 minutos.
Los valores de Kf y Kg de fructosa y glucosa respectivamente, oxidados a 55°C se obtienen a partir de las curvas estándar de estos dos azúcares, de la forma descrita para K. La proporción de Kg a Kf ó Q se utiliza para el...