Quimica






OBTENCION y SEPARACION de los PIGMENTOS VEGETALES de HOJAS de ESPINACA.
PARTE 2: CROMATOGRAFIA EN COLUMNA


INTRODUCCION
Ya en la sesión anterior abordamos parte del fundamento de la Cromatografía, en particular de la TLC. Pero como el estudiante se habrá dado cuenta, la TLC tiene una limitante: la separación de los compuestos es posible pero solo para unos cuantos microgramosde la muestra, es decir, hasta ahora no hemos podido separar la cantidad total del extracto vegetal, por lo tanto, la TLC es solo analitica. Aun así, es posible separar el extracto vegetal mediante una ‘Placa Preparativa’ (25×25 cm y 0.5 cm de espesor) pero su uso también es limitado a una cantidad no mayor de 200 mg de muestra. Un método más convencional para lograr este propósito es laCromatografía en Columna (CC) que obedece al mismo principio de la TLC, pero a diferencia de esta última, la CC es capaz de separar cantidades mucho mayores de muestra; la CC no trabaja por capilaridad sino por gravedad.



OBJETIVO GENERAL

Purificar cada uno de los pigmentos vegetales obtenido de las hojas de espinacas por Cromatografía en Columna.





OBJETIVOS PARTICULARES
1) Comprenderel fundamento de la CC mediante la separación total de cada uno de los pigmentos obtenidos de las hojas de espinacas.

2) Cuantificar el contenido de clorofila β del extracto vegetal.

3) Comprender la relación entre la TLC y la CC, similitudes y diferencias.

4) Conocer los factores que afectan y determinan la separación exitosa de una mezcla por CC.

MARCO TEORICO

Este apartadoforma parte de la investigación extra-clase del alumno, por lo que deberá describirlo en su Plan de trabajo. Puntos a calificar en el Marco Teórico.

‘Fundamento de la Cromatografía en Columna (CC)’
Los otros puntos como: Disolventes más usados y orden de polaridad de los mismos, y Generalidades de los pigmentos fotosintéticos y fotosíntesis ya han sido descritos en el Plan de Trabajo anterior porlo que se prescindirán de ellos.

MATERIAL Y REACTIVOS

MATERIAL
REACTIVOS Y MATERIAL
Concentrado del pigmento (recolectado en la práctica anterior)
Bata, lentes de seguridad y cubrebocas.
Algodón
Buretas
una cuchara de platico desechable
3 pipetas pasteur con bulbo (microperilla)
15 tubos de ensaye con gradilla.
Matraz erlenmeyer de 100 mL
Embudos de tallo corto.
Espátula.Franela.
1 manguera de látex (80 cm de largo)
1 soporte universales
2 pinzas de tres dedos con contrapinza o nuez.
Escobillón, zacate y detergente.
Bureta
Sílica gel
Metanol
Acetato de etilo
Hexano
Sulfato de Sodio anhidro (Na2SO4)
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CONSIDERACIONES PREVIAS
1) Durante toda la sesión hasta el final de la misma, el equipo expositorserá el responsable de mantener la limpieza de la balanza analítica, de los reactivos y de la campaña de extracción, así como de la limpieza y orden del laboratorio al final de la práctica.

2) La entrada y estancia del alumno en el laboratorio estará condicionada al respeto de las normas de seguridad previamente discutidas (sesión 1). El uso de bata, lentes de seguridad y cubrebocas esimprescindible. Las señoritas deberán tener en todo tiempo el pelo debidamente recogido. Queda estrictamente prohibido el uso de sandalias o cualquier calzado abierto.

3) Precaución, la sílica gel es altamente peligrosa si es ingresada a vías respiratorias causando cáncer de pulmón a largo plazo, por lo que este paso deberá realizarse en la campana de extracción usando siempre cubrebocas.PROCEDIMIENTO

Preparación de la Columna de Cromatografía (asesoría del profesor):

1) A la parte inferior de una bureta se le coloca un tapón (no muy ajustado) de algodón por la parte interior, esto podrá hacerse con la ayuda del vacío.

2) Se agrega un poco de sulfato de sodio anhidro al interior de la bureta.

3) Posteriormente agregar sílica gel a la bureta haciendo uso de la cuchara...