Radioinmunoensayo

RADIOINMUNOANALISIS SIMULTANEO DE CINCO HORMONAS ESTEROIDALES
MYRIAM SÁNCHEZ DE GÓMEZ*, VIRGINIA MONTES DE GÓMEZ*

SUMARIO En este trabajo se describe un método para la determinación de androstendiona, progesterona.dihidi'otestosterona, testosterona y 17—hidroxi—progesterona en muestras de 1 ml de suero femenino y masculino. Después de la extracción de los esteroides la mezcla es sometida acromatografía en una columna de Lipidex—5000 (hidroxialcoxipropil Sephadex) en n— hexano: cloroformo 95:5. La evaluación final de los diferentes esteroides se hace por medio de radioinmunoanálisis específicos usando carbón—dextrano [jara separar las fracciones libre y ligada de la radioactividad. Los cinco compuestos se resolvieron en cuatro fracciones eluyendo conjuntamente androstendiona yprogesterona, las cuales fueron determinadas específicamente usando antisueros selectivos. La recuperación varió entre 63.5 y 93.7% siendo los valores más bajos para dihidrotestosterona. La interferencia o blanco para los cinco esteroides fue inferior al límite de detección de los radioinmunoanálisis (10 pg) y la exactitud, usando el criterio de la prueba de pureza radioquímica, fue comprobada para losanálisis de progesterona y testosterona. En un estudio comparativo se analizaron las cinco hormonas en un grupo de hombres y mujeres normales mediante la determinación directa del extracto y después de la etapa cromatográfica. En la mayoría de los casos se encontraron diferencias significativas entre los promedios de uno y otro método y solo en uno de ellos (17—hidroxiprogesterona en sueromasculino) no hubo diferencia. Se establecieron los niveles de estos esteroides en suero femenino en las fases folicular y luteal del ciclo menstrual y en algunos de ellos se estudió la variación circadiana. Dichos niveles también se determinaron después de practicar pruebas de estímulo y/o de freno para su secreción, en muestras provenientes de pacientes con sospecha de alteración relacionada con elhirsutismo.

Departamento de Química, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional, Bogotá, Ckjiombia.

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SUMMARY A method for the determination of androstenedlone, progesterone, dihydrotestosterone, testosterone and 17—hydroxyprogesterone in 1 ml samples of male and female blood serum is described. After extraction of the steroids they are chromatographed on a column of Lipidex-5000(hydroxyaikoxypropyl Sephadex) in n-hexane:chloroform, 95:5. The final measurement of the individual steroids is made by radioimmunoassay using dextran—coated charcoal in the separation of bound and unbound radio activity. We resolved these f ive compounds into four fractions with androstenedlone and progesterone eluting together, which were also determined specifically by use of selected antibodies. Theoverall recovery ranged from 63.5 to 93.7%, the lowest valúes being for dihydrotestosterone. Blank valúes for all steroids were below the detection limits of the assays (10 pg) and the accuracy, in terms of the radiochemical purity test, was confirmed for progesterone and testosterone determinations. ln a comparative study the serum concentrations of these five steroids in a group of normal malesand females were measured by direct assay of the extract and after the chromatographic step. All the assays gave slgnificant differences in the means by the two methods, except for 17—hydroxyprogesterone in male serum, where the means were indistinguishable. Also concentration valúes are presented for women in the follicular and luteal phases of the menstrual cycle, some of them measured forcircadian rythm. ln addition, valúes obtained in a group of patients with alterations related with hirsutism are given after simulation and inhibition tests. INTRODUCCIÓN La introducción del radioinmunoanálisis (RÍA) en el campo del análisis de las hormonas esteroidales incrementó apreciablemente la sensibilidad de las determinaciones. De esta manera fue posible establecer las bajísimas concentraciones...