Radioinmunoensayo (ria)

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RADIOINMUNOENSAYO (RIA)



Esta técnica fué desarrollada por Solomon A. Berson y Rosalyn Yalow en 1960 para determinar la concentración de insulina en el plasmasanguíneo. Por ese motivo, R. Yalow recibió el Nobel de Medicina en 1977 (Berson murió en 1972). Hoy en día, esta técnica se utiliza para detectar y cuantificar sustancias que seencuentran en cantidades muy pequeñas y mezcladas con muchas otras. Es por tanto una técnica muy sensible y muy específica. Utilizando anticuerpos de gran afinidad se pueden detectarhasta picogramos de antígeno. (1 pg = 10-12 g).

El fundamento es muy sencillo:

* Se mezcla una cantidad constante de antígeno marcado radioactivamente y una cantidadconstante de un anticuerpo para ese antígeno
* Se produce la reacción entre antígeno (Ag) y anticuerpo (Ac)
* se separa la fracción de antígeno que se ha unido de laque permanece libre (hay varias formas de hacerlo. En la figura inferior se utiliza un 2º anticuerpo dirigido contra el primero)
* se determina la radioactividad
* Sila muestra contiene además antígeno frío (no marcado), éste competirá con el marcado para unirse al anticuerpo, y se observará un descenso en la medida de la radioactividad* Se construye una curva de calibrado (color rojo) que relacione la medida de radioactividad (cpm) con la concentración de antígeno frío en la muestra
* Si se realizael ensayo con una muestra que contiene una cantidad desconocida del antígeno no marcado y se mide la radioactividad asociada a los anticuerpos, por interpolación sobre lacurva de calibrado se puede estimar la concentración del antígeno frío en la muestra.

* Este descenso es proporcional a la concentración de antígeno frío en la muestra
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