sistema nervioso

El CAPÍTULO 2 Reproducción Molecular y Expresión de Proteína
2.1 INTRODUCCIÓN
La clonación molecular es un proceso para la manipulación de ADN que difiere de célula clonación y la clonación animal completo (aunque algunos de los pasos involucrados en el proceso son comunes). La clonación molecular se utiliza no sólo para lograr una mejor comprensión de la estructura, función y control degenes y sus productos génicos, sino también para la explotación comercial de proteínas. La producción de proteínas recombinantes en formas que son biológicamente útil es un reto clave para la industria farmacéutica y molecular clonación conduce a la expresión de proteínas de interés es el foco principal de este capítulo.
Los sistemas de expresión bacterianos son muy atractivos en este sentido para unnúmero de razones, incluyendo:
-sus altas tasas de crecimiento;
- su capacidad de utilizar sustratos relativamente baratos;
-su bien caracterizado genética;
- la disponibilidad de un gran número de vectores de clonación; y
- una variedad de cepas huésped mutantes.
Producción de proteínas 'requiere el éxito de tres factores individuales: expresión, solubilidad y purificación’. Mientras quela expresión bacteriana sistemas tiene una serie de graves inconvenientes, muchos de estos han sido más o menos resuelto en los últimos 20 años. El reto ahora es producir la proteína con un buen rendimiento y en la forma correcta.
2.2 CUESTIONES RELACIONADAS CON HOST-
Puede ser difícil decidir a qué sistema anfitrión y promotor es más adecuada para la producción de proteína heteróloga y lanaturaleza de la proteína que se expresa a menudo es un factor clave para determinar el éxito producción de la proteína. Un enfoque racional de la expresión de la proteína basado en las propiedades y la procedencia de la proteína de interés, y entonces decidir qué máquina podría ser el mejor para su expresión, sigue sin estar disponible. Más bien, el enfoque ha estado en la otra dirección: desarrollandosistemas para la clonación molecular y expresión de proteínas en organismos huéspedes comúnmente usados​​. Por lo tanto, tiene sentido comenzar con consideraciones relacionados con el huésped.
Muchos huéspedes bacterianos se han optimizado para la proteína heteróloga producción, en parte, en un intento de identificar una más o menos universal sistema con pocos problemas. A pesar de todo estetrabajo, el proceso de Gram-negativos bacteria E. coli es el microorganismo más comúnmente usado para heterólogo la producción de proteínas, principalmente porque este organismo es muy bien conocido y establecido. Por lo tanto no es de extrañar que los sistemas de E. coli son también las más comúnmente utilizado para la producción de proteínas industriales y farmacéuticos.
A pesar de ello, "laproducción de proteínas solubles en E. coli sigue siendo un hit-ormiss asunto ".
Los anfitriones más populares son E. coli, B. subtilis, levadura y células cultivadas de eucariotas superiores tales como células de insecto o de mamífero. E. coli es frecuentemente utilizado porque la gran masa de información disponible hace es relativamente bien conocida y existen protocolos bien caracterizados para lamanipulación de este microbio. Sin embargo, hay muchas proteínas para que E. coli no es el anfitrión ideal para la expresión, incluyendo proteínas que tiene más de 500 aminoácidos, aquellas que son muy hidrófobos, proteínas que tienen cisteínas muchos (debido a que el entorno de reducción en E. coli impide la formación de enlaces disulfuro) y que exigen los modificación post-traduccional o otrostratamientos.
Si la proteína de interés es de un organismo eucariota, ya que a menudo es una proteína que tiene interés comercial, entonces hay inmediatamente tres problemas asociados con su expresión en un sistema procariota tal como E. coli, y estos problemas se refieren a la diferencia en la mecanismo de la expresión génica entre los dos sistemas.
En primer lugar, las bacterias no son...