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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS Y FARMACIA
ESCUELA DE QUIMICA BIOLOGICA
DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

Práctica No. 6
“Cromatografía de Exclusión Molecular”
Jenifer Palacios 200817089, Jessica Salazar 200810171, Ana Mendoza 200817194, Lesly Ovalle 2007
INTRODUCCIÓN:
La cromatografía de exclusión molecular o filtración en gel, es una técnica utilizadapara la separación de proteínas, ácidos nucleídos y otras macromoléculas, basándose en su peso, la diferencia de tamaños, ya que la mezcla de proteínas se deja fluir por gravedad a lo largo de una columna empaquetada con un material formado de partículas hidratadas de geles muy especiales (Sephadex G-50) que sirven como malla debido a la porosidad de estos. De tal forma que se logra la separación delas moléculas de mayor tamaño debido a que éstas serán las primeras en eluir ya que no son capaces de quedarse atrapadas dentro de la porosidad del gel por su gran peso molecular.
Los objetivos de la práctica consisten en separar de una solución la proteína y la sal y determinar su presencia en las fracciones obtenidas.

METODOLOGÍA:
Esta técnica se realizó con la preparación de una columnacromatográfica preparada con Sephadex G-50 y como fase móvil agua.
Se sedimentaron completamente las partículas por acción de gravedad al agregarle suspensión gel, para llevar a cabo la separación de la mezcla (por medio de fracciones) que permite extraer a las moléculas de mayor peso molecular primero (proteína), ya que no se introducen dentro de las mallas del gel y luego a las moléculas debajo peso molecular después (la sal), ya que estas últimas se introducen dentro de las redes del gel y su trayecto es mas largo. En la segunda parte se utilizaron pruebas de caracterización para las proteínas como Biuret y la prueba de nitrato de plata para la precipitación de la sal. Para medir la concentración de proteínas se utilizó la espectrofotometría.

RESULTADOS:
Tabla No. 1“Características de precipitación, coloración y absorbancia de las pruebas aplicadas a solución de proteínas”

|No. |TUBO Ag NO3 |Biuret |Abs nm |
|1 |- |+ |0,00 |
|2 |- |+ |0,00 |
|3 |- |+ |0,00 |
|4 |+|+ |0,181 |
|5 |+ |+++ |0,062 |
|6 |+ |++++ |0,044 |
|7 |++++ |+++ |0,035 |
|8 |++++ |++ |0,00 |
|9 |++++ |+ |0,00 |
|10|++++ |+ |0,00 |
|11 |+++ |+ |0,00 |
|12 |- |+ |0,00 |
|13 |- |+ |0,00 |
|14 |- |+ |0,00 |
|15 |- |+|0,00 |

Nota:
- Indica que no hubo precipitado de proteínas en la prueba de AgNO3 y en la prueba de Biuret que no hubo cambio de coloración.
+ Indica la cantidad de precipitado que se formó en el caso de la prueba de AgNO3, y en la prueba de Biuret representa cantidad de coloración.

Fuente: Datos experimentales obtenidos en laboratorio del Depto. de Bioquímica del Edificio T-12USAC.

GRAFICA No. 1 “

[pic]
Fuente: Datos experimentales obtenidos en laboratorio del Depto. de Bioquímica del Edificio T-12 USAC.

DISCUSIÓN:
En los primeros tubos de ensayo no hubo proteínas presentes, lo cual se ve reflejado con la absorbancia que igual a 0, de los tubos 4 al 7 se observó la mayor cantidad de proteína eluida, puesto que estas eluyen al agregar la solución a la...
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