tecnicas de espectro fotometria
Páginas: 9 (2122 palabras)
Publicado: 19 de mayo de 2013
05-05-2013
Técnicas utilizadas frecuentemente en
laboratorio de bioquímica
Espectrofotometría y técnicas
inmunológicas
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que
permite determinar la concentración de un compuesto en
solución.
Espectrofotometría de absorción
Se basa en que las moléculas absorben radiación
electromagnética y que la cantidad absorbida depende deforma
lineal de la concentración.
Para hacer este tipo de medidas se emplea un
espectrofotómetro.
En este instrumento se puede
seleccionar la longitud de onda
de la luz que pasa por una solución
y medir la cantidad de luz absorbida
por la misma.
1
05-05-2013
El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de
las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas lasradiaciones dentro del espectro UV-visible.
Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula
puede
absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la
estructura atómica y de las condiciones del medio (pH,
temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica)
La espectroscopia constituye una valiosa herramienta para la
determinación y caracterización de biomoléculas.Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el
vidrio que parece ser completamente transparente absorbe en
longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua
absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas
depende de la estructura de las moléculas, y es característica para
cada sustancia química.El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas
longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo
dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no
absorbida.
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05-05-2013
Espectro Electromagnético
Cubre un amplio intervalo de E radiante, desde los rayos g de
longitud de onda corta hasta las ondas de radio, de longitud de
onda larga. Lasregiones más importantes para le espectrsoscopía
son:
Ultravioleta: 10-380 nm
Visible: 380-780 nm
Infrarroja: 780-30.000 nm
Espectro de Absorción
En general, cada molécula tiene un determinado espectro de
absorción.
En el espectro de absorción se representa la Absorbancia vs la
longitud de onda.
Es importante
trabajar a la longitud
de onda a la que la
sustancia estudiada
tieneun máximo de
absorción.
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05-05-2013
La fuente de radiación visible es una lámpara de tungsteno y la de
radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio.
Diversos factores como pH, concentración de sal y el
disolvente, que alteran la carga de las moléculas, pueden
provocan desplazamientos de los espectros de absorción.
Cuando radiación de una determinada longitud de onda deintensidad Io incide sobre una solución de un compuesto
químico que absorbe luz (cromóforo), el compuesto absorbe
una parte de la radiación incidente y deja pasar el resto I
La transmitancia se define como:
I es la cantidad de luz transmitida por la muestra
e I0 es la cantidad total de luz incidente.
Muchas veces encontraremos la transmitancia
expresada en porcentaje, según la fórmula:
4 05-05-2013
La absorbancia (A) puesto que nos indica la cantidad de luz
absorbida por la muestra y se define como:
A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.
Ley de Lambert-Beer
Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz
monocromática y la concentración de un cromóforo en solución:
A = log I/Io = ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a
suconcentración
La absorbancia depende también de la distancia que recorre la
luz por la solución (l) y de una constante denominada coeficiente
de extinción (ε), que es específica de cada cromóforo.
Como A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de las
de c y l.
l se expresa siempre en cm mientras que la concentración en M,
con lo que las dimensionesde ε resultan ser M-1·cm-1
Este...
Técnicas utilizadas frecuentemente en
laboratorio de bioquímica
Espectrofotometría y técnicas
inmunológicas
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que
permite determinar la concentración de un compuesto en
solución.
Espectrofotometría de absorción
Se basa en que las moléculas absorben radiación
electromagnética y que la cantidad absorbida depende deforma
lineal de la concentración.
Para hacer este tipo de medidas se emplea un
espectrofotómetro.
En este instrumento se puede
seleccionar la longitud de onda
de la luz que pasa por una solución
y medir la cantidad de luz absorbida
por la misma.
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05-05-2013
El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de
las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas lasradiaciones dentro del espectro UV-visible.
Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula
puede
absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la
estructura atómica y de las condiciones del medio (pH,
temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica)
La espectroscopia constituye una valiosa herramienta para la
determinación y caracterización de biomoléculas.Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el
vidrio que parece ser completamente transparente absorbe en
longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua
absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas
depende de la estructura de las moléculas, y es característica para
cada sustancia química.El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas
longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo
dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no
absorbida.
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05-05-2013
Espectro Electromagnético
Cubre un amplio intervalo de E radiante, desde los rayos g de
longitud de onda corta hasta las ondas de radio, de longitud de
onda larga. Lasregiones más importantes para le espectrsoscopía
son:
Ultravioleta: 10-380 nm
Visible: 380-780 nm
Infrarroja: 780-30.000 nm
Espectro de Absorción
En general, cada molécula tiene un determinado espectro de
absorción.
En el espectro de absorción se representa la Absorbancia vs la
longitud de onda.
Es importante
trabajar a la longitud
de onda a la que la
sustancia estudiada
tieneun máximo de
absorción.
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05-05-2013
La fuente de radiación visible es una lámpara de tungsteno y la de
radiación ultravioleta es una lámpara de deuterio.
Diversos factores como pH, concentración de sal y el
disolvente, que alteran la carga de las moléculas, pueden
provocan desplazamientos de los espectros de absorción.
Cuando radiación de una determinada longitud de onda deintensidad Io incide sobre una solución de un compuesto
químico que absorbe luz (cromóforo), el compuesto absorbe
una parte de la radiación incidente y deja pasar el resto I
La transmitancia se define como:
I es la cantidad de luz transmitida por la muestra
e I0 es la cantidad total de luz incidente.
Muchas veces encontraremos la transmitancia
expresada en porcentaje, según la fórmula:
4 05-05-2013
La absorbancia (A) puesto que nos indica la cantidad de luz
absorbida por la muestra y se define como:
A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.
Ley de Lambert-Beer
Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz
monocromática y la concentración de un cromóforo en solución:
A = log I/Io = ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a
suconcentración
La absorbancia depende también de la distancia que recorre la
luz por la solución (l) y de una constante denominada coeficiente
de extinción (ε), que es específica de cada cromóforo.
Como A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de las
de c y l.
l se expresa siempre en cm mientras que la concentración en M,
con lo que las dimensionesde ε resultan ser M-1·cm-1
Este...
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