Tecnicas de laboratorio

Técnicas GENERALES DE LABORATORIO

RESUMEN
Para aprender a manejar balanzas analíticas, medir volúmenes (pipetas serológicas, volumétricas, micropipetas), preparar diluciones de sustancias cromogénicas, construir espectros de absorción y curvas de calibración, se midió distintos volúmenes en cada instrumento y se prepararon soluciones, a las cuales se les midió la absorbancia a lalongitud de onda máxima del espectro de absorción correspondiente al compuesto. Se graficó la absorbancia vs concentración de la solución y se obtuvo que en la Gráfica 1 se encontraron tres picos de absorbancia, uno de 280, otro de 606 y el último de 650nm siendo éste el que se utilizó para tomar las absorbancias y realizar la curva. En el Gráfico 2, los picos de absorbancias obtenidos fueron de 220,280 y 406nm, utilizando este último para realizar la curva. En el Gráfico 3, los picos de absorbancia obtenidos fueron de 220 y 280nm, a diferencia de los otros dos experimentos en los cuales se obtuvieron tres picos y se utilizó el último para realizar la curva de calibración. Se puede concluir que en las tres curvas obtenidas se pudo observar que no se cumplía la ley de Lambert-Beer pues en todasse veían desviaciones y en ninguna una línea recta, lo cual se pudo deber a errores al momento de determinar la absorbancia tanto del original como de la réplica.
INTRODUCCIÓN
La mayoría de los problemas analíticos reales comienzan con una compleja mezcla a partir de la cual es necesario aislar, identificar y cuantificar uno o más componentes de la misma.
Se pueden plantear lassiguientes cuestiones: una, de carácter cualitativo (¿de qué componente se trata?), y otra de carácter cuantitativo (¿cuánto hay de ese componente?).
Para ello, se puede utilizar el método instrumental de análisis, como es la espectrofotometría para medir la absorción de radiación ultravioleta y visible que interactúa con la materia (átomos y moléculas), la misma es considerada unatécnica cualitativa y cuantitativa basándose en la medición del color o de la longitud de onda de una radiación e intensidad de la misma.
La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolución se miden con un aparato denominado espectrofotómetro. Por otra parte, La espectrofotometría es un método analítico que utiliza los efectos de la interacción de las radiaciones electromagnéticascon la materia (átomos y moléculas) para medir la absorción o la transmisión de luz por las sustancias.
La curva de calibración es un método de control de calidad en espectrofotometría, su objetivo es disminuir al máximo el error y que los resultados se encuentren lo más cerca posible del valor verdadero.
La relación entre la absorción de luz por una solución diluida o por un gas y laconcentración de la fase absorbente viene dada por la ley de Beer. La relación entre la absorción de la luz y el camino recorrido por ésta (es decir, el espesor de la cubeta) viene dada por la ley de Lambert. Es conveniente considerar ambas leyes conjuntamente.
Para deducir la ecuación que se busca se postula, en primer lugar, que cada cuanto de luz que penetra en la solución tiene igualoportunidad de ser absorbido. Esto implica que la luz es monocromática. En segundo lugar, se postula que cada molécula de la sustancia que absorbe tiene igual oportunidad de interceptar y absorber un cuanto de luz, cualquiera que sea su situación dentro de la cubeta. Esto implica que la solución es suficientemente diluida para que ninguna molécula quede oculta en la sombra. Una vez consideradosestos postulados, se tiene que:
A=εcl
Donde: A=absorbancia
ε=coeficiente de absortividad molar
c=concentración de la muestra
l=longitud del haz de luz dentro de la muestra
La ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia está directamente relacionada con las propiedades intrínsecas del analito, con su concentración y con la longitud de la trayectoria del haz de...