Tecnicas De Purificacion Y Caracterizacion De Proteinas

Tecnicas De Purificacion Y Caracterizacion De Proteinas
Presentation Transcript
1. IBI. Fernando Acosta Gómez
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Una célula contiene millones de proteínas distintas, separarlas y determinarsu estructura es extremadamente difícil.
La purificación depende de lo que se va a determinar en una proteína:
Peso Molecular
Punto isoeléctrico
numero de subunidades
numero de aminoácidos
tipode aminoácidos
secuencia de aminoácidos
Una vez determinados los Aminoácidos:
Cromatografía según su polaridad.
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5. Para estudiar detalladamente las propiedades de cualquier proteína espreciso contar con una muestra homogénea que sólo contenga moléculas de un tipo. Las técnicas de separación se concentran en el tamaño, la carga y la polaridad, que es donde residen las diferencias de lasmoléculas. Se aplican muchas técnicas para eliminar contaminantes y lograr una muestra pura de la proteína de interés. El porcentaje de recuperación indica cuánto de la proteína de interés se haconservado en cada paso.
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Para estudiar detalladamente las proteínas se necesita extraer las proteínas de la células y orgánulos subcelulares.
Homogeneización: Ruptura de la célula.
Moler eltejido en una licuadora
homogeneizador Potter-elvejhem.
8. Después de la homogeneización, las células se someten a centrifugación diferencial, la muestra se hace girar a unas 500 veces la fuerza dela gravedad (500 x g). Si la proteína deseada no se consigue, entonces la velocidad aumenta, por ejemplo a 10 000 x g, para separar las mitocondrias y así hasta obtener las proteínas deseadas para suinvestigación. Una vez solubilizadas, se someten a una purificación bruda, comúnmente hecha con el sulfato de amonio y a esto se le conoce como precipitación por sales .
9. Uso de centrifugacióndiferencial para separar los componentes de las células. Partiendo de un homogeneizador de células, una fuerza gravitacional (g) creciente hará que se sedimenten diferentes componentes de las células...