Tesis

PARTE EXPERIMENTAL 3. MATERIALES Y METODOS:
Para la validación de cualquier técnica analítica, todos los equipos deben estar validados, calibrados o calificados según sea el caso. Todo material de vidrio debe

ser previamente despirogenado por un proceso validado. Los materiales plásticos deben comprarse apirógenos.

3.1 Equipos, materiales, reactivos y muestra 3.1.1 Equipos : - Cabina deflujo laminar

Tipo: Cabina de Flujo Horizontal

Marca: Gelaire

Modelo: N.A.

Cumple especificaciones de ambiente Clase 100.

Cumple las siguientes especificaciones: Conteo de partículas no viables > 0,5µm/m3 a < 5,0 µm/m3 = 3 500 Conteo de partículas viables < 3 ufc/ m3 Velocidad de flujo de aire : 0,45 m/s + 20% Integridad de filtro 0 – 5 µm > 5 µm

Calificada

- 43 -

-Horno de Despirogenización
Marca : WTB Binder Indicador de Temperatura : WTB Binder Modelo : 990684

Validado con el registrador multicanal : Calificación de instalación Calificación de operación Distribución de calor Sin carga Con carga Carga patrón Calificación de desempeño Desafío biológico : Endotoxinas Funcionamiento : 250 º C x 1 hora

-

Baño maría
Marca : Memmert Modelo : W – 200 Serie: 770833

-

Calificada Calificación de termómetro Distribución de calor con carga y sin carga Temperatura de uso : 37 º C + 1 º C

-

Termómetro
Marca : Control Company Serie : 20279933

Calibrado Calibración realizada por terceros garantizado por certificado. (INDECOPI)

- 44 -

- Cronómetro
Marca : Control Company Serie : 99316474

Calibrado Calibración realizada porterceros garantizado por certificado. (INDECOPI)

- Micropipeta de 100µL y 10µL µ µ
Marca : Eppendorf Número : 35046

Calificada Prueba de reproducibilidad de volumen Conforme. Certificado del proveedor

- Vortex , agitador de tubos
Marca : LABNET Modelo : VX – 100 Serie : 21119010

Calibrado Verificación de velocidades por empresa de mantenimiento preventivo

- 45 -

3.1.2 Materiales : -Tubos apirógenos de 10 x 75 mm
Marca: Charles River Endosafe Lote: 31701D

- Tips apirógenos de 5 - 100µL certificados µ
Marca: Brand

-

Lote: 218278

- Tiras indicadoras de pH
Marca: Merck Lote: 80264695 Artículo: 1.09535.0001

- Gradillas plásticas

- 46 -

3.1.3 Reactivos :
- (1) Agua reactivo LAL - (2) Control Estándar de endotoxinas - (3) Reactivo Lisado de AmebocitosLote: 99732011 Lote: 93 Lote : 502-07-261 Expira : Abril 2006 Expira: Mayo 2008 Expira: Julio 2007

(1)

(2)

(3)

3.1.4 Muestra:
La muestra corresponde a tres lotes de Clindamicina inyectable Lote 002103 / Lote 005023 / Lote 007043.

- 47 -

3.2 Metodología del Trabajo : Prueba LAL – Método Gel Clot
La Prueba LAL por el Método de Gel Clot es el método mas sencillo, mas usado y mascómodo cuyos resultados son fáciles de leer ya que sólo hay positivos o negativos. El objetivo de este trabajo es determinar su aplicación al producto en mención

Clindamicina 600mg/4mL tres partes (4)(25)(26) : -

inyectable, para ello se debió seguir sus pasos que constan de

Confirmación de la Sensibilidad del Reactivo LAL Prueba Preliminar de Gel Clot : Cuantificación Validación: Inhibición yMagnificación.

También se llevó a cabo la prueba Gel Clot : Limit test, que no cuantifica las unidades de endotoxinas presentes si no que evalúa el producto en el límite para aprobarlo o rechazarlo.

3.2.1 Confirmación de la Sensibilidad del Reactivo LAL
Consiste en verificar si el reactivo tiene la sensibilidad declarada

comparándolo con un estándar de endotoxinas certificado. Se definecomo sensibilidad a la capacidad del reactivo para reaccionar con una concentración mínima de endotoxinas necesaria para dar un resultado positivo bajo condiciones estándar, se expresa con el símbolo λ (Lambda). (25) El rango aceptable para la sensibilidad es de 0,5 λ a 2 λ (De 0,015 a 0,06 para un reactivo con sensibilidad declarada de 0,03UE/mL) Para su confirmación, se enfrentó diferentes...