tincion sanguinea

1. Tinción de Wright
Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios colores. Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro básico (azul de metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorciónpor los diferentes componentes celulares.
Materiales:
• Colorante de Wright: para 100 mL se requiere de colorante de Wright (0.3g), metanol (97.0 mL) y glicerol (3.0 mL). Disolver en un mortero el colorante con el glicerol. Una vez disuelto se adiciona el metanol trasvasándolo a un frasco oscuro. Agitar. Filtrar antes de usar.
• Solución amortiguadora tamponada: en un litro de agua destiladase agregan 3.76 g de hidrofosfato disódico (Na2HPO4* 2H20) y 2.10g de fosfato de potasio dihidrogenado (KH2PO4). Mezclar todos los reactivos y guardar en frasco de vidrio en lugar fresco. Ajustar el pH a 7.2.
• Rejilla horizontal o soporte de tinción
Técnica:
• Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia arriba (ver figura 4).
• Cubrircompletamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a evaporar.
• Agregar directamente al colorante un volumenigual de amortiguador de Wright, para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.
• Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista.
• Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol paraeliminar cualquier resto de colorante.
• Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión

Resultados:
• Los eritrocitos se observarán de color naranja o rosado.

El citoplasma de los monocitos presentarán una tonalidad azul grisácea con gránulo rojizos bastante finos y sus vacuolas características. El citoplasma de los linfocitos presentará varias tonalidadesazules.
• Los núcleos de los linfocitos y neutrófilos aparecerán de color púrpura oscuro. Los núcleos de los monocitos de color púrpura algo más claros (lila).
• Los gránulos de los eosinófilos son de color rojo-anaranjado intenso. Los gránulos de los basófilos púrpura azulado muy oscuro. Los gránulos de los neutrófilos se aprecian de color lila, bastante finos.
• Las plaquetas tomancoloración violeta o púrpura

Tinción de Giemsa
Es la segunda coloración en uso, luego de la tinción de Wright, y en importancia de las mezclas de Romanowsky. Es quizás la mejor modificación de este tipo de coloraciones para descubrir parásitos en la sangre, como en el caso de malaria (Plasmodium spp.) y tripanosomiasis (Trypanosoma cruzi). El colorante de Giemsa también da excelentes resultados parala tinción rutinaria de frotes sanguíneos. Cuando se va a teñir con este colorante, debe fijarse primero la muestra con metanol absoluto por un tiempo mínimo de tres minutos (cuando la preparación no incluye metanol). El colorante en solución nunca se utiliza de manera directa, por lo que se debe diluir con la solución amortiguadora en una proporción de 1:10 ó 1:20 y el tiempo de coloración podráser de 10 ó 20 minutos, respectivamente.
Material:
Colorante de Giemsa (constituido por una mezcla de azul de metileno, eosina y varios azures en dilución acuosa): 1.0g del colorante en polvo, 66mL de metanol absoluto y 66mL de glicerol. Se debe disolver el colorante con el glicerol, adicionar el metanol, mezclar bien y dejar a temperatura ambiente de 7-14 días (maduración). Filtrar antes de...