tincion y coloraciones

TINCIONES
TEMA 5TEMA 5EXAMEN MICROSCÓPICO DE LAS BACTERIASEXAMEN MICROSCÓPICO DE LAS BACTERIAS
Examen en fresco: se puede realizar tanto desde muestras clínica como desde cultivos.Es necesario que los cultivos sean jóvenes ya que los microorganismos de los cultivosviejos pierden movilidad y gran parte de ellos están lisiados. Existen varias técnicas para elexamen en fresco:~ Preparacioneshúmedas (porta y cubre): cuando partimos de un cultivo líquido bastacon poner una gota del producto entre porta y cubre. Si la muestra es de cultivo sólido ponemos 1 gota de agua estéril o suero fisiológico en un porta y tomamos en un asa de platinouna pequeña cantidad de cultivo sólido, emulsionamos suavemente sobre el porta y colocamossuavemente sobre el porta y colocamos el cubre presionando conprecaución de que no seformen burbujas de aire, llevamos a observar al microscopio en general con objetivo de 40X.El inconveniente de este método es que la preparación se seca muy rápidamente y además no permite observar tan bien la movilidad del microorganismo como en la gota pendiente.~ Método de la gota pendiente: se utilizan unos portas especiales con una o variasexcavaciones. Se coloca 1 gota dela suspensión en el centro del cubre con un asa previamenteesterilizada, a continuación se coloca el porta sobre el cubre de forma que la gota desuspensión coincida con el centro de la excavación después se le dará la vuelta rápidamente al porta manteniéndola cubre en su posición. El tamaño de la gota debe ser el adecuado paraevitar la evaporización y suficientemente pequeña par evitar elcontacto con el porta. Estemétodo permite observar mejor la movilidad del germen.~ Examen en fresco con nigrosina: mediante este método se obtienen imágenes en lasque destacan las bacterias incoloras sobre un fondo negro parduzco. Se utiliza principalmente par el estudio de detalles estructurales como cápsulas y flagelos. En el centro de un porta secoloca con el as a 1 ó 2 gotas de nigrosina (mejor quetinta china) a continuación con el asa setoman unas gotas del material estudio y se mezclan lo más homogéneamente posible. Se secaal aire y se observa con el objetivo de inmersión.Coloraciones vitales: las tinciones o coloraciones vitales son montajes de materia vivateñidos suelen utilizarse par ello determinados colorantes (azul de metileno, rojo neutro,...) a bajas concentraciones. Su objetivo esfacilitar la observación mediante el colorante de lamorfología y estructura bacteriana pero sin provocar alteraciones celulares no destruir la bacteria.Preparaciones fijadas y coloreadas: este tipo de preparaciones son las más frecuentestanto las obtenidas directamente a partir de muestras clínicas como las obtenidas a partir dedesarrollo de cultivos. Puede ser:1·- tinciones simples: son las queutilizan un solo colorante y permiten conocer lamorfología y tipos de agrupación bacteriana.A·- Tinción de azul de metileno.B·- Tinción fucsina fenicada.2·- tinciones diferenciales: utilizan más de un colorante y sirven para poner de manifiestolas características de afinidad de ciertos microorganismo.A·- Tinción del GRAMB·- Tinción de los bacilos ácidos-alcohol-resistente (BAAR)3·- tincionesestructurales: utilizan más de un colorante y sirven para poner de manifiestoestructuras bacterianas.A·- Tinción de flagelos: método de Rhodes, de Tribordeau, de Leifson.B·- Tinción de esporas: métodos de Moeller, de Wirtz-conklinC·- Tinción de cápsulas: método de Hiss, de tinta chinaD·- Tinción de corpúsculos metacromáticos: métodos de Albert, de Loeffler

Realización del frotis:• Para larealización del frotis: puede prepararse a partir de productos líquido o sólido.Si el producto es líquido se coloca sobre un porta una gota del material a estudiar y seextiende con ayuda del asa de platino.Si el material es sólidos (esputo, colonias) se pasa sobre la superficie del porta el hisoposobre el que se ha formado la muestra. Una vez que se ha confeccionado el frotis se pasa alsecado.• Secado:...