TINCION

Introducciòn
El imperceptible tamaño de las bacterias y otros microorganismos así como la dificultad para observarlas en detalle con el microscopio óptico por causa de la falta de contraste que existe entre estos, debido a que son usualmente transparente en el medio que les rodea; hizo que se crearan métodos para poder apreciarlas, siendo “los métodos más sencillos el de fijación y tinción,iniciados por Paul Ehrlich y Robert Koch, los que permitieron a los microbiólogos distinguir muchas características estructurales normalmente vistas” así el uso de colorantes, es el medio más simple de aumentar el contraste. Estos pueden utilizarse para distinguir entre distintos tipos de células o para apreciar la presencia de algunos elementos celulares, como flagelos, esporas, cápsulas, paredescelulares, mitocondrias, núcleos, membranas celulares, etc.


Objetivo.

Que el alumno identifique las características de los microorganismos utilizando diferentes técnicas de tinción.


Marco Teórico.

Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar laobservación en microscopio óptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algún tratamiento previo. De acuerdo a la reacción que ocurre, existen diferentes tipos de tinción:


Tinción de Gram. (Bacterias)
Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram,quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram Positivas y Gram Negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias). Las bacterias Gram Positivas y Gram Negativas se tiñen de forma distintadebido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el Peptidoglicano. La pared de la célula Gram Positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de Peptidoglicano así comoalgo de Ácido Teicoico.

Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula Gram Positiva es Peptidoglicano. La pared de la célula Gram Negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de Peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula Gram Negativa esPeptidoglicano.

Prueba del KOH al 3% para corroborar la Tinción de Gram. (Bacterias)
Después de tener la Tinción de Gram se puede realizar una sencilla prueba para observar si se hizo correctamente dicha Tinción; se hace de la siguiente manera: Se coloca sobre la lámina una gota de KOH al 3% y con el asa hacer en ella suspensión de colonias de la bacteria problema mezclando con movimientos giratoriosdurante 1 a 3 minutos, si al separar el asa de la mezcla se forma una hebra viscosa indica que se trata de bacterias Gram Negativas y si la hebra no se forma se trata de bacterias Gram Positivas.

Tinción Negativa de Tinta China. (Levaduras)
Se trata de una tinción negativa usando tinta china que permite determinar la presencia de cápsulas polisacarídicas. La cápsula bacteriana es la capa con bordedefinido formada por una serie de polímeros orgánicos que en las bacterias se deposita en el exterior de su pared celular. Generalmente contiene glicoproteínas y un gran número de polisacáridos diferentes, incluyendo polialcoholes y aminoazúcares. La cápsula es una capa rígida organizada en matriz impermeable que excluye colorantes como la tinta china. En cambio, la capa de material extracelular...