Tinciones

Tinción Simple.
Se denomina así, porque solo se utiliza un colorante, generalmente básico.
Con este tipo de coloración no se pretende diferenciar microorganismos o estructuras celulares.
Las técnicas de coloración simple pueden ser positivas cuando el colorante es
fijado por las células apareciendo los microorganismos de color oscuro o coloreado sobre un fondo luminoso o claro, y sonnegativas cuando los microorganismos no fijan el colorante, en cuyo caso el fondo es el que se tiñe y los microorganismos aparecen brillantes sobre fondo oscuro.

Procedimiento:
1. Cubrir la extensión debidamente preparada con la solución colorante.
2. Dejar actuar el colorante por 1 minuto.
3. Lavar con agua corriente hasta eliminar exceso de colorante.
4. Dejar secar al aire o presionando elportaobjetos entre 2 capas de papel absorbente como papel filtro ó papel sanitario.
5. Una vez seca la extensión, colocar sobre ella una gota de aceite de inmersión y observar al microscopio con el objetivo de inmersión.

Tinciones Diferenciales
La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se utiliza para
distinguir entre varios tipos de células bacterianas. Una tincióndiferencial típicamente consiste de tres pasos principales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para teñir a todas las células en la tinción; enseguida un paso de decoloración, el cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de células y finalmente un colorante de contraste, el cual tiñe las células recién decoloradas pero no tiene efecto sobre las células que aún retienen el coloranteprimario.

Tinción Diferencial De Gram
La tinción propuesta por el médico danés Christian Gram en 1884, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. La reacción de la tinción de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias. Las bacterias Gram positivas tienen muchas capas depeptidoglucano, las cuales a su vez, sostienen moléculas de ácido teicoico. El ácido teicoico reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizado en este proceso de tinción. Un complejo de las moléculas cristal violeta-yodo-ácido teicoico es muy difícil de remover. Como la pared celular de las
células Gram positivas retiene estos compuestos, es más difícil decolorar una célula Gram positiva que una Gramnegativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la célula Gram negativa, pero no de la Gram positiva. Esta mezcla de alcohol también disuelve mucho de la capa exterior de lipopolosacárido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual acelera la remoción del colorante primario cristal violeta de estas células.
Cuando otro colorante, usualmente safranina, se añade, las célulasGram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram negativas absorben el color rojizo de la safranina. Al final del procedimiento de tinción, las células Gram positivas serán del color del cristal violeta, o colorante primario, y las células Gram negativas serán del color de la safranina que es el colorante de contraste.
Procedimiento:
1. Marcar un portaobjetos con el nombre delmicroorganismo a observar.
2. Elaborar preparaciones fijas de las bacterias a observar.
3. Añadir 1 ó 2 gotas de cristal violeta a la preparación, hasta que se cubra por
completo. Dejar actuar el colorante durante 1 minuto.
4. Una vez transcurrido el tiempo, lavar la preparación con agua.
5. Agregar 1 ó 2 gotas de solución lugol a la preparación, y dejar actuar 1 minuto.
Transcurrido eltiempo, lava.
6. Con cuidado, añadir gota a gota el alcohol-acetona lavando la preparación durante 15 segundos.
7. Añadir el colorante de contraste, safranina (1 ó 2 gotas) y dejar actuar durante 1 minuto. Escurrir el exceso.
8. Dejar secar al aire y observar al microscopio.

Tinción Diferencial De Ziehl-Neelsen
Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium se caracterizan por...