Tinciones de microorganismos

I. INTRODUCCIÓN

Las células microbianas son organismos bastante pequeños. Entre sus principales características de las bacterias figuran su tamaño, su forma, su estructura y su tipo de agrupación. Estas características constituyen la morfología de la célula. El tamaño de una bacteria es mensurable con exactitud, no obstante sus dimensiones microscópicas.

Según su especie, lasbacterias son esféricas, en forma bastones o de espiral.

En algunas especies, las bacterias se organizan en grupos, siendo los más comunes de ellos pares, racimos, cadena y filamento. Conviene conocer estas formas de agrupaciones porque con frecuencia son características de un grupo taxonómico, por ejemplo, un género.

Algunas especies de bacterias poseen también apéndices que se ponen demanifiesto gracias a las técnicas especiales de tinción o por el microscopio electrónico.

Aspectos morfológicos como el tamaño, la forma y la agrupación se consideran características morfológicas generales de las células bacterianas.

Las células bacterianas poseen una anatomía intracelular característica, descubrimiento que pudo hacerse mediante el perfeccionamiento de las técnicas delmicroscopio electrónico y gracias a la invención de instrumento para llevar a cabo cortes sumamente finos en una bacteria.

II. OBJETIVOS

✓ Diferencias las formas y características marginales de las colonias presentes en los medios de cultivo sólidos.
✓ Identificar la cápsula de una muestra microbiana coloreada.
✓ Afianzar las técnicas de coloración simple y coloracióngram.
✓ Identificar las esporas bacterianas de una muestra microbiana coloreada.

III. MATERIALES

I.

II.

III.

1. Material biológico

✓ Suspension de Bacillus Subtilis.
✓ Suspension de Escherichia Coli.
✓ Suspensión de Staphylococcus aerus.
✓ Suspensión de esporas de Bacillus Subtilis.
✓ Cultivo deBacillus Subtilis.
✓ Cultivo de Klebsicilla sp.
.

2. Material de laboratorio

✓ Láminas portaobjetos
✓ Set de coloración de gram
✓ Microscopios compuestos
✓ Mecheros
✓ Azas bacteriológicas

IV. PROCEDIMIENTO

A. COLORACIÓN SIMPLE AZUL DE METILENO :

✓ Flameamos el aza bacteriológico frente a unmechero hasta el rojo vivo. Esperamos que se enfriara.

✓ Colocamos dos azadas de la suspensión de Staphylococcus aerus, en forma aséptica en el centro de la lámina. Aceleramos el secado de la lámina pasándolo ligeramente por el mechero.

✓ Luego le agregamos el colorante de azul de metileno encima de la muestra seca durante 1 minuto.

✓ Eliminamos el exceso de colorante y lavamosligeramente la lámina con agua destilada.

✓ Secamos la lámina lavada con la ayuda del mechero.

✓ Luego observamos las láminas en el microscopio con el respectivo aumento.

B. COLORACIÓN GRAM :

✓ Flameamos el aza bacteriológico frente a un mechero hasta el rojo vivo. Esperamos que se enfrié.

✓ Colocamos dos azadas de la suspensión de Bacillus Subtilicis, en formaaséptica en el centro de la lámina.

✓ Aceleramos el secado de la lámina pasándolo ligeramente por el mechero.

✓ Agregamos a la lámina fijada de St. Aeurus una solución de cristal violeta hasta que cubra la muestra durante un minuto.

✓ Eliminamos el exceso de colorante, lavando la lámina con agua destilada y agregamos lugol durante 1 minuto.

✓ Luego volvemos aeliminar el exceso de colorante, lavando la lámina con agua destilada.

✓ Agregamos el decolorante (alcohol etílico) a la lámina lentamente, realizamos hasta que se desprenda más colorante violeta, e inmediatamente lavamos con agua.

✓ Escurrimos el agua de la lámina y adicionamos safranina durante 60 segundos.

✓ Luego volvemos a eliminar el exceso de colorante, lavando la lámina...