Algunas tinciones utilizadas en microbiologia para la observacion morfologica de estructuras en microorganismos.

Practica de laboratorio Curso de Microbiología Programa: ecología de zonas costeras Universidad de Antioquia, 2009

ALGUNAS TINCIONES UTILIZADAS EN MICROBIOLOGIA PARA LA OBSERVACION MORFOLOGICA DE ESTRUCTURAS EN MICROORGANISMOS. ADAN TORRES M, RICARDO PEREZ M.

RESUMEN Se realizaron tinciones, diferencial (de Gram) para cultivos bacterianos de E. coli, S. aureus y B. cereus, y especial (deSchaeffer y Fulton) para cultivos de B. Cereus y B. subtilis. Se encontró para la primera tincion, una bacteria gram negativa y dos gram positivas. Con la tinción especial se pudo observar células con espora intracelular terminal no deformante, para los dos cultivos utilizados.
PALABRAS CLAVE: tinción diferencial, tinción especial, Gram positiva, Gram negativa, espora, no deformante.INTRODUCCION En general, las bacterias y otros microorganismos son transparentes, lo que dificulta su estudio cuando las observaciones se realizan en fresco. Por esta razón, cuando se requiere conocer los detalles morfológicos es conveniente acudir a técnicas de tinción (García, 1986). Los colorantes, simplemente aumentan el contraste entre la célula y el medio que le rodea. Si solamente se desea aumentar elcontraste de las células para la microscopía, son suficientes las técnicas que usan un solo colorante; llamado de tinción simple. También existen otros métodos que no tiñen de igual modo a todas las células o a sus estructuras; proceso conocido como tinción compuesta y/o diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción de Gram, con el cual las bacterias pueden clasificarse en dos grupos:gran positivas y gran negativas (Urtis, 2009). Algunos géneros de bacterias como bacillus, clostridium, Sporosarcina, Sporolactobacillus y

Desulfotomaculum, tienen la capacidad de formar endosporas. Estas modificaciones de las bacterias, son más resistentes a condiciones adversas y a los procedimientos tintoriales. La aplicación de un solo colorante a una célula bacteriana que contiene unaendospora, solo tiñe la célula, pero la espora se mantiene incolora. Para lograr introducir el colorante dentro de la espora es necesario aplicar calor. La tinción de Schaeffer y Fulton emplea verde malaquita como colorante primario, el cual es eliminado posteriormente del resto de la célula bacteriana, pero no de la espora, mediante un enjuague con agua. Como contra-tincion se emplea safranina, lacual tiñe la célula vegetativa (Rodríguez et al., 2005). En la presente práctica de laboratorio, se utilizaran las coloraciones, especial (de Schaeffer Y Fulton) y diferencial (de Gram), con el fin de identificar endosporas bacterianas e identificar bacterias gram negativas y gram positivas.

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Practica de laboratorio Curso de Microbiología Programa: ecología de zonas costeras Universidad deAntioquia, 2009

MATERIALES Y METODOS TINCION DIFERENCIAL: de Gram Materiales Cultivos previamente realizados de: a) Escherichia coli b) Staphylococcus aureus c) Bacillus cereus ----colorantes a) b) c) d) Solución de cristal violeta Solución de safranina Solución de yodo (lugol) Alcohol acetona

Materiales Cultivos previamente elaborados de: a) Bacillus cereus b) Bacillus subtilis ------colorantes a) Verde de malaquita b) Solución de safranina -----microscópio -----aceite de inmersión -----asa -----portaobjetos -----mechero Procedimiento Para cada uno de los cultivos de bacterias ( (B. cereus y B. subtilis), se realizo un extendido de , bacterias sobre un portaobjetos y se llevo a la llama para fijar los microorganismos microorganismos. Cada placa se cubrió con verde de malaquitadurante cinco minutos, colocándola a la llama del , mechero hasta observar vapor, pero sin dejar secar la solución. Se dejo enfriar la placa y se lavo con agua. Finalmente se adiciono safranina durante un minuto, se lavo y se dejo secar, para observar al microscopio en 100x. RESULTADOS Tincion Diferencial: de Gram e

-----microscópio -----aceite de inmersión -----asa -----portaobjetos -----mechero...