Tinciones en microbilogía
Páginas: 6 (1293 palabras)
Publicado: 19 de mayo de 2010
TINCIONES
ELABORACIÓN DE FROTIS FIJOS PARA TINCIONES
1. Utilizar laminillas limpias y con un lápiz graso delinear el área donde se va a colocar la muestra.
2. Con el asa microbiológica se coloca una pequeña gota del cultivo que se va a teñir si esta proviene de un medio líquido. Cuando se toma a partir de un medio sólido, se coloca una gota de agua destilada en la laminilla y se mezclabien con un poco del crecimiento del cultivo.
3. Extender la gota sobre la laminilla formando una capa fina. Debe evitarse preparar un frotis demasiado grueso.
4. Dejar secar las laminillas a temperatura ambiente.
5. Cuando se haya secado el frotis pasar la laminilla 3 veces por la llama del mechero con la capa del frotis hacia arriba, teniendo cuidado de no aplicar calor en formaexcesiva.
1. TINCIÓN DE GRAM
La tinción de Gram es aplicada en forma universal como primer paso en la identificación de levaduras. Este método divide a las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas, de acuerdo a los componentes predominantes de su pared celular.
Al colorear los microorganismos con cristal violeta o violeta de genciana (colorante primario) y añadirles unasolución débil de yodo (Mordente) se combinan estos con algunos componentes de la célula bacteriana y son retenidos por la pared celular.
Posteriormente, cuando se tratan con alcohol acetona (decolorante) la pared de las bacterias sufre una deshidratación que impide la salida del colorante. En consecuencia, la safranina (colorante de contraste) es incapaz de penetrar en la pared celular.PROCEDIMIENTO
1. Preparar el frotis: se coloca una gota de agua destilada estéril en el portaobjetos y se mezcla bien con un poco del crecimiento del cultivo.
2. Extender la gota sobre el portaobjetos formando una capa fina. Debe evitarse preparar un frotis demasiado grueso.
3. Dejar secar las laminillas a temperatura ambiente.
4. Cuando se haya secado el frotis pasar la laminilla 3veces por la llama del mechero con la capa del frotis hacia arriba, teniendo cuidado de no aplicar calor en forma excesiva ya que estropearía la morfología normal y la estructura de los microorganismos que se van a teñir.
5. Cubrir la preparación fijada con la solución de cristal violeta durante un minuto.
6. Lavar con agua.
7. Cubrir el frotis con lugol por un minuto.
8.Lavar con agua.
9. Decolorar con alcohol acetona.
10. Lavar rápidamente con agua.
11. Contrastar con la solución de safranina por un minuto.
12. Lavar con agua, secar al aire y examinar con el objetivo de inmersión (100x).
PRUEBA DE KOH AL 3% PARA CORROBORAR LA TINCIÓN DE GRAM
Esta prueba consiste en colocar sobre una laminilla una gota de KOH al 3% y con el asa hacer enella una suspensión de colonias de la bacteria mezclando con movimientos giratorios durante 1 a 3 minutos. Si al separar el asa de la mezcla se forma una hebra viscosa, esto indica que de trata de bacterias gram negativas, Si la hebra no se forma, entonces se trata de gram positivas.
2. TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
LA ácido-alcohol resiestncia está determinada por la composición de la paredcelular. En el método de Ziehl-Neelsen, la penetración de la fucsina fenicada (colorante primario) se facilita debido a que se encuentra disuelta en fenol y a que se aplica en presencia de calor, una vez que penetra a la célula bacteriana, se combina con los componentes de la pared celular volviéndola más hidrofóbica.
Todas las bacterias se tiñen con el colorante primario, pero al aplicar unamezcla de alcohol ácido (decolorante) esta no solubiliza los lípidos de las pared de las bacterias ácido-alcohol resistentes y por lo tanto no se decoloran, mientras que las bacterias no ácido-alcohol resistentes son decoloradas fácilmente, por lo que se vuelven a teñir al aplicar azul de metileno (colorante de contraste).
Las bacterias ácido-alcohol resistentes se observan de color rojo y las no...
ELABORACIÓN DE FROTIS FIJOS PARA TINCIONES
1. Utilizar laminillas limpias y con un lápiz graso delinear el área donde se va a colocar la muestra.
2. Con el asa microbiológica se coloca una pequeña gota del cultivo que se va a teñir si esta proviene de un medio líquido. Cuando se toma a partir de un medio sólido, se coloca una gota de agua destilada en la laminilla y se mezclabien con un poco del crecimiento del cultivo.
3. Extender la gota sobre la laminilla formando una capa fina. Debe evitarse preparar un frotis demasiado grueso.
4. Dejar secar las laminillas a temperatura ambiente.
5. Cuando se haya secado el frotis pasar la laminilla 3 veces por la llama del mechero con la capa del frotis hacia arriba, teniendo cuidado de no aplicar calor en formaexcesiva.
1. TINCIÓN DE GRAM
La tinción de Gram es aplicada en forma universal como primer paso en la identificación de levaduras. Este método divide a las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas, de acuerdo a los componentes predominantes de su pared celular.
Al colorear los microorganismos con cristal violeta o violeta de genciana (colorante primario) y añadirles unasolución débil de yodo (Mordente) se combinan estos con algunos componentes de la célula bacteriana y son retenidos por la pared celular.
Posteriormente, cuando se tratan con alcohol acetona (decolorante) la pared de las bacterias sufre una deshidratación que impide la salida del colorante. En consecuencia, la safranina (colorante de contraste) es incapaz de penetrar en la pared celular.PROCEDIMIENTO
1. Preparar el frotis: se coloca una gota de agua destilada estéril en el portaobjetos y se mezcla bien con un poco del crecimiento del cultivo.
2. Extender la gota sobre el portaobjetos formando una capa fina. Debe evitarse preparar un frotis demasiado grueso.
3. Dejar secar las laminillas a temperatura ambiente.
4. Cuando se haya secado el frotis pasar la laminilla 3veces por la llama del mechero con la capa del frotis hacia arriba, teniendo cuidado de no aplicar calor en forma excesiva ya que estropearía la morfología normal y la estructura de los microorganismos que se van a teñir.
5. Cubrir la preparación fijada con la solución de cristal violeta durante un minuto.
6. Lavar con agua.
7. Cubrir el frotis con lugol por un minuto.
8.Lavar con agua.
9. Decolorar con alcohol acetona.
10. Lavar rápidamente con agua.
11. Contrastar con la solución de safranina por un minuto.
12. Lavar con agua, secar al aire y examinar con el objetivo de inmersión (100x).
PRUEBA DE KOH AL 3% PARA CORROBORAR LA TINCIÓN DE GRAM
Esta prueba consiste en colocar sobre una laminilla una gota de KOH al 3% y con el asa hacer enella una suspensión de colonias de la bacteria mezclando con movimientos giratorios durante 1 a 3 minutos. Si al separar el asa de la mezcla se forma una hebra viscosa, esto indica que de trata de bacterias gram negativas, Si la hebra no se forma, entonces se trata de gram positivas.
2. TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN
LA ácido-alcohol resiestncia está determinada por la composición de la paredcelular. En el método de Ziehl-Neelsen, la penetración de la fucsina fenicada (colorante primario) se facilita debido a que se encuentra disuelta en fenol y a que se aplica en presencia de calor, una vez que penetra a la célula bacteriana, se combina con los componentes de la pared celular volviéndola más hidrofóbica.
Todas las bacterias se tiñen con el colorante primario, pero al aplicar unamezcla de alcohol ácido (decolorante) esta no solubiliza los lípidos de las pared de las bacterias ácido-alcohol resistentes y por lo tanto no se decoloran, mientras que las bacterias no ácido-alcohol resistentes son decoloradas fácilmente, por lo que se vuelven a teñir al aplicar azul de metileno (colorante de contraste).
Las bacterias ácido-alcohol resistentes se observan de color rojo y las no...
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