Tinciones microbiológicas

Tipos de tinciones:
* Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).

* Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienendistinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo 6 que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan más de un colorante.
*Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej; tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos. Pueden utilizarse uno o más colorantes.

Tinciones Simples:
a) Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular.Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.
Procedimiento
1. Extensión: poner una gota de agua en el portaobjetos y extender en ella la muestra (Escherichia y Bacillus) utilizando el asa de siembra.2. Fijación: pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero de alcohol,sin permitir que llegue a hervir, hasta que se seque.
3. Añadir Azul de metileno y esperar 2 minutos.
4. Lavar con agua
5. Secar.
6. Observar primero con el objetivo 40×; luego se añade aceite de inmersión y se observa con el objetivo 100×. Tinción básica: se usa azul de metilenoque si tiñe a las células.

b) Nigrosina (Tinción negativa). Se trata de un colorante aniónico, que no penetra en el interior celular. Proporciona una visión de la forma y el tamaño celulares al observarse los microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro.
Procedimiento
1. Colocar una gota de Nigrosina sobre uno de los extremos del portaobjetos.
2. Extender la muestra(Escherichia y Bacillus) en la gota con el asa de siembra.
3. Realizar un frotis: con un segundo portaobjetos se extiende la muestra de modo que cubra toda la superficie del primero.
4. Secar al aire.
5. Observar (primero 40× y luego 100× con aceite de inmersión).

Tinciones Selectivas: (Estructurales)
a) Tinción de corpúsculos metacromáticos en células de Lactobacillus.Procedimiento
1. Tomar una muestra de un yogurt con el asa de siembra y colocar en un portaobjetos.
2. Teñir con azul de metileno como se ha descrito anteriormente.
En esta preparación se observan dos microorganismos: Lactobacillus (con los corpúsculos metacromáticos en su interior) y Streptococcus (forman cadenas).

b) Tinción de endosporas.
Las bacterias de los géneros Bacillus yClostridium se caracterizan porque forman endosporas. Las endosporas son formas de resistencia que garantizan la supervivencia de la especie en situaciones adversas (agotamiento de nutrientes, cambios de temperatura, acumulación de metabolitos tóxicos...). Estas estructuras, que contienen una copia completa del genoma, se desarrollan en el interior de la célula bacteriana y cuando la célula muerey se lisa la endospora queda libre. Las endosporas germinarán cuando las condiciones ambientales vuelvan a ser favorables. Algunas enfermedades muy conocidas son producidas por especies de los géneros Clostridium [ej. C. tetani (tétanos), C. perfringens (gangrena gaseosa) y C. botulinum(botulismo)] y Bacillus [ej. B. anthracis (antrax)].
Procedimiento
1. Extensión (B. megaterium)....