Tinciones

Universidad de Concepción
Facultad de Ciencias Biológicas
Departamento de Microbiología











Laboratorio N°1

Introducción al laboratorio de Bacteriología





















Nombre: Camila Arriagada
Carrera: Ingeniería Ambiental
Fecha de entrega: 4.Septiembre.2012
Profesor: Miguel Martínez
Ayudanta: Paulina González
Asignatura: MicrobiologíaSección: 1
• Introducción:
En este laboratorio se observaran bacterias a dos niveles, macroscópico y microscópico, por medio de observaciones a fresco y aplicando distintos tipos de tinciones para observar con mayor detalle al microrganismo, las técnicas de tinción utilizadas serán simples, diferenciales, de Gram, de Ziehl-Neelsen y tinciones especiales.

• Objetivos:
- Sercapaces de analizar un microrganismo a nivel macro y microscópico.
- Aprehender las distintas técnicas de estudio a microrganismos como tinción y morfología.
- Con las técnicas de tinciones diferenciales identificar una bacteria Gram positiva de una Gram negativa.
- Familiarizarnos con los elementos del laboratorio y conocer las reglas para este tipo de laboratorio.


•Metodología:
I. Introducción al laboratorio:
Esta parte fue dirigida por el profesor Miguel Martínez y la ayudanta Paulina González en el cual explicaron las reglas básicas de un laboratorio, como manipular las herramientas características de un laboratorio de microbiología para finalmente explicar los procedimientos a realizar.


II. Observación de Bacterias:
a.Observaciones al fresco:
Este tipo de observaciones es la mejor opción para analizar el tipo de traslación de las bacterias. Este movimiento es rápido y en forma de zigzag, cruzándose continuamente. Es fácil confundir este tipo de traslación con el movimiento en un solo sentido y se debe a que es producto de la corriente del fluido en el que se encuentra. También podemos observar una constante vibraciónconocida como movimiento browniano que les ocurre a las bacterias cuando están suspendidas en agua a causa de los choques de las moléculas del fluido.


b. Tinciones simples:
En esta parte del laboratorio se preparó un frotis de la siguiente manera: primero colocamos agua en un portaobjetos con el asa curva previamente esterilizado con el mechero, luego una pequeña porción de un cultivode bacterias con un asa recta, también esterilizado, lo esparcimos para que quede una capa delgada de muestra, esperamos a que se seque un poco y finalmente pasamos por el mechero el portaobjetos evitando el recalentamiento y así tenemos nuestro frotis listo para aplicarle una de las tres tinciones posibles; Violeta de genciana, en que hay que esperar 15 segundos antes de lavarlo para eliminar elexceso de colorante, Safranina (20 seg.) o azul de metileno (30 seg.). Luego de lavada la muestra, secamos el portaobjeto entre dos capas de papel absorbente sin frotarlo. Finalmente anotamos las observaciones realizadas con el microscopio usando el objetivo de inmersión 100X y utilizando una gota de aceite de inmersión sobre la muestra.






c. Observación Macroscópica deBacterias:
Las bacterias pueden crecer sobre la superficie de medio de cultivo sólido y originar una estructura macroscópica característica. Esta se conoce con el nombre de Colonia Bacteriana y su forma y su tamaño es característico de cada especie.

d. Tinciones Diferenciales:
Este tipo de tinciones nos permiten reconocer a tipos de bacterias según la afinidad que tienes con loscolorantes que utilizaremos en ellas así las bacterias que presenten el mismo color pertenecen a un grupo determinado.
Con este tipo de tinciones podemos caracterizar a las bacterias a nivel estructural principalmente por el tipo de pared bacteriana que puedan poseer.

✓ Tinción de Gram:
« Permite, de acuerdo con las estructura y grosor de la pared bacteriana, agrupar las bacterias en...