TP3 IBMC


Introducción a la biologia molecular y celular



Trabajo práctico Nº:3



Electroforesis en geles de agarosa

Grupo 6:

Franco, Agustín

Heinze, Bárbara

Osorio, Jonás








Introducción:

El TPexplica la utilidad del proceso de electroforesis, que puede ser para simplemente visualizar las diferencias en las moléculas o para purificarlas. También introduce el concepto de “topoisómeros” loscuales son moléculas idénticas que adoptan distinta forma (isoformas), en el caso de los plásmidos estas isoformas pueden ser: superenrrollada (CCC), círculo abierto (OC), y lineal (L). Dichasisoformas afectan la manera de migrar de las moléculas. También se indicó las diferencias entre geles de agarosa y de poliacrilamida. Como este último conforma poros más pequeños se lo suele usar paramoléculas más chicas, como las proteínas.

Objetivo:

Presenciar una electroforesis de DNA plasmídico y comprobar la presencia de los topoisómeros de este.

Procedimiento:

Se siguió el procedimientodescripto en la guía. Utilizando compuestos nuevos como por ejemplo el TAE, se lo utiliza como buffer en lugar de agua destilada ya que garantiza la circulación de corriente eléctrica y hace posible elprocedimiento, el bromuro de etidio (BrEt) el cual es clave para analizar los resultados, ya que se integra a los ac. Nucleicos, entre sus bases, y permite visualizarlo al irradiarlo con luz UV. Se utilizóademás, xilene-cianol y azul de bromofenol los cuales le dan color a la muestra para poder identificarla, y permiten darse cuenta del avance de la corrida ya que migran también hacia el ánodo, y porúltimo el glicerol que le da densidad a la muestra y evita que difunda a través del buffer de corrida, estos tres compuestos además facilitan la siembra.

Resultado:

Figura 1: Vista con rayos UV paraidentificar los ac. nucleicos presentes en la muestra. Calles (1-3-9-11-13): plásmido extraído por alumnos, con RNasa. Calles (2-8-10-12-14): plásmido extraído por alumnos, sin RNasa. Calle 4:...