Traduccion

Regulacion de la succinato deshidrogenasa en Escherichia coliSuspensiones lavadas de Escherichia coli succinato oxidan cuando previamente crecido en succinato pero no en glucosa. Un ritmo más lento de la oxidación se produjo con bacterias cultivadas con peptona como fuente de carbono. Estas diferencias se deben a alteraciones en el nivel de actividad de la succinato deshidrogenasa. La glucosareprime la biosíntesis de la enzima, mientras que succinato actuado como inductor específico y no aumentó la actividad de hidratasa fumarato, malato deshidrogenasa o NADH deshidrogenasa. El crecimiento aeróbico también aumenta los niveles de la membrana succinato deshidrogenasa. La inducción de la succinato deshidrogenasa por succinato añadido siguió el cinética esperados. La adición de glucosaprovocó un descenso de la tasa de biosíntesis de succinato deshidrogenasa. Succinato deshidrogenasa parece desempeñar un papel importante, ya que respiratoria amital (un inhibidor de la NADH oxidasa) inhibió el crecimiento sólo ligeramente cuando se utilizó succinato como fuente de carbono en comparación con la fuerte inhibición del crecimiento cuando se usó glucosa como fuente de carbono.INTRODUCCIÓN
Succinato deshidrogenasa es la única enzima unida a la membrana del ciclo ácido tricarboxílico en Escherichia coli (Marr, 1960) y, por lo tanto, puede participar en la respiraciónademás de funcionar en el ciclo de ácido tricarboxílico. Los cambios en el medio ambiente puede en consecuencia afectar tanto a la actividad respiratoria y el funcionamiento del ciclo del ácido tricarboxílico.Influencia de las condiciones de crecimiento sobre la biosíntesis y la actividad de deshidrogenasas unidas a membrana y los citocromos de bacterias está bien documentada (Gray, Wimpenny y Mossman, 1966; Cavari, Avi-Dor y Gressowicz, 1968; Rufz-Herrera & De MOSS, 1969).
Los estudios preliminares (RubHerrera, 1968) han sugerido que el sustrato de crecimiento de carbono era importante en el gobiernode la síntesis de la succinato deshidrogenasa en E. coli. Este estudio presenta nuevos datos sobre los mecanismos que controlan la biosíntesis de succinato deshidrogenasa en esta bacteria.
MÉTODOS
Organismo y las condiciones de crecimiento. Escherichia coli Hfr H, obtenido de JA de MOSS, Universidad de California, San Diego, EE.UU., se mantuvo en agar nutritivo (Difco) y crecido en el mediodescrito por Sypherd y Strauss (1963) con 5 pug de tiamina 1 ml y ya sea I% 0,5% glucosa o succinato. Este medio se conoce como 'medio sintético'; para se añadió 'medio complejo', caldo nutritivo (Difco) al 0,4%. Las bacterias se cultivaron a 37 "C durante 4 a 5 h, el medio se roció con aproximadamente 2 volúmenes de aire estéril / volumen de cultura / min. Para las condiciones anaeróbicas, loscultivos se roció con una mezcla de 95% N2 + 5% COz. La densidad bacteriana se midió por medio de un fotocolorímetro Klett utilizando un verde filtro y el contenido de proteína se calculan a partir de la turbidez con un apropiado curva de calibración.
Preparación de extractos libres de bacterias y cepas bacterianas. Las bacterias se centrifugaron, se lavó con 0,05 w tampón de fosfato, pH 7,3, y roto conun 10 kHz Branson Sonifier (Calor Sistemas Ultrasonidos, Plainview, Nueva York, EE.UU.) durante tres períodos sucesivos de 15 s cada uno. El extracto se centrifugó a 4008 durante 15 min y el sobrenadante utilizado como extracto crudo. Sobres bacterianas se aislaron por resuspensión de las bacterias en 0,5 ml de Buffer-HCl 0,05 M-tris, pH 8,3, que contiene 20% de sacarosa y 2 mg de lisozima (SigmaChemical Co. Inc., St. Louis, Missouri, EE.UU.) Jml y congelados en una mezcla de C02-acetona sólido. Después descongelación a 37 "C, el tratamiento se repitió cuatro veces. Cinco ml de tampón de fosfato 0,05 M que contiene 10 pg DNasa (Sigma Chemical Co.) se añadieron / ml y se mezcló hasta que el rápidamente la viscosidad disminuye. El extracto crudo se centrifugó a 50000G durante 10 min, el...