Transformación Genética De Solanum Cardiophyllum Mediada

XII JORNADAS DE INVESTIGACIÓN
Revista Investigación Científica, Vol. 4, No. 2, Nueva época. Mayo - Agosto 2008
ISSN 1870-8196
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Transformación genética de Solanum cardiophyllum mediada
por Agrobacterium rhizogenes
Ana María Reyes Contreras
Leticia Almanza Sánchez
José C. Sánchez Pérez
Miguel Alvarado Rodríoguez
Unidad Académica de Agronomía
Universidad Autónoma de Zacatecas
SaúlFraire Velázquez
Unidad Académica de Biología Experimental
Universidad Autónoma de Zacatecas
Resumen
Para contribuir a al preservación y al mejoramiento genético de la papita de
campo, se desarrolló una metodología de micropropagación y transformación
genética vía Agrobacterium rhizogenes. Se utilizó el medio de cultivo Murashige-
Skoog con diversas concentraciones de la auxina AIA (0-0.4 mg/l),de la citocinina
BA (0-4.0 mg/l) y del ácido giberélico AG3 (0-1.0 mg/l) y un incremento del 10% en
las sales de nitrógeno, para establecer el sistema de regeneración in vitro; las
plántulas obtenidas se subcultivaron para establecer la tasa de multiplicación y
evaluar el mejor balance hormonal para su micropropagación. Para la
transformación genética se utilizó la cepa bacteriana A4 deAgrobacterium
rhizogenes, que contiene el plásmido silvestre pRiA4 y además el vector binario
pESC4. Se cocultivó a concentraciones de 107
, 108 y 109 bacterias/ml con
segmentos nodales de plántulas micropropagadas. Se realizaron de manera
exitosa las pruebas histológica (GUS) y de Biología Molecular (PCR) para comprobar
la incorporación de transgenes. En esta última prueba se identificaron unsegmento de 780 pb del gen rol B del plásmido silvestre y un segmento de 517 pb
del gen nptII del vector binario.
Palabras claves: cardiophyllum, micropropagación, Agrobacterium
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Introducción
La transformación genética en plantas, es un proceso por el cual el ADNexógeno
y de interés, es introducido al núcleo de las células vegetales que pueden ser
parte de un explante en un cultivo morfogénico o protoplasto y una vez que el
ADN es introducido mediante una serie de procedimientos, se regenera una planta
completa transformada genéticamente, partiendo de dichas células
transformadas (van der Salm et al., 1996).
Existen varios métodos para incorporargenes exógenos al genoma de las
células vegetales y uno de los más utilizados es mediante Agrobacterium
rhizogenes (Tzfira, 2008). La técnica requiere el desarrollo previo de una
metodología de regeneración in vitro de la especie vegetal que se desee
transformar genéticamente (Pérez et.al., 1999).
Entre las especies no cultivadas en peligro de extinción se encuentran las
papas silvestres,consideradas entre las primeras plantas utilizadas como alimento
por los antiguos pobladores de América (Ugent, 1987) aunque, actualmente el uso
de implementos de labranza modernos, provocan abatimiento de las poblaciones
de estas especies arvenses (Davis y Bye, 1982), siendo las más afectadas en el
altiplano Potosino-Zacatecano Solanum cardiophyllum y S. ehrenbergii.
Estas especies silvestresmuestran cualidades que las distinguen de otras
especies de papas, tales como la resistencia a condiciones de baja humedad y
un alto valor nutrimental, pues contiene 3.2% de proteína, alta riqueza en
carbohidratos y vitamina C, además de una gran resistencia a la agresividad de
patógenos como Phytophtora infestans y Alternaria solani (Galindo, 1982). Las
especies arvenses S. brachistotricum, S.cardiophyllum Lindley subesp. Ehrenbergii
Bitter resisten el ataque a todos los virus que afectan a las variedades de S.
tuberosum, por lo que son una fuente potencial de germoplasma para programas
de fitomejoramiento de papa cultivada (Luna-Cabazos et al, 2007).
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