Técnicas De Estraccion De Proteinas

TÉCNIAS DE EXTRACCIÓN DE PROTEÍNAS
Las proteínas son las moléculas orgánicas más abundantes en la célula, ellas constituyen más del 50% del peso seco de la célula. Cada tipo celular, tiene un rol específico determinado por su composición proteica. Con la posibilidad de que 20 (o 22) aminoácidos diferentes puedan estar unidos en cualquier orden para conformar polipéptidos de cientos deaminoácidos, tienen el extraordinario potencial de producir una gran cantidad de variantes en su conformación. Esta variedad genera funciones tan refinadas como las de las enzimas que están involucradas en el metabolismo celular. Una bacteria puede tener cerca de 1000 proteínas diferentes, en una célula humana puede haber más de 10.000 clases de proteínas distintas.
La composición protéica de las célulasen un determinado momento depende del conjunto
de genes que se estén activando y esto está relacionado directamente con las señales que recibe la célula, de su micro ambiente y de las características celulares que le son propias.
Existen ciertas moléculas de proteínas llamadas inhibidoras de proteasas (IP), las cuales son capaces de impedir la actividad proteolítica de las enzimas.
Laproteólisis consiste en la degradación de forma total o parcial de las proteínas, la cual se lleva a cabo por vía química o enzimática (proteasas) y por los inhibidores de proteasas pueden ser impedida o regulada.

La extracción de proteínas celulares comienza siempre con una ruptura o disrupción celular o lisis para con ello poder separar todos los organelos y esto lo podemos llevar acabo por lossiguientes métodos:
a) Métodos físicos mecánicos:
Agitación con abrasivos:
1. Se utilizan un recipiente donde se agrega algún agente abrasivo, como bolas de vidrio.
2. El sistema se hace vibrar lo que produce:
• Colisiones de las bolas con la biomasa
• Fuertes esfuerzos de cortes
• Se produce la ruptura de las células.
3. Posteriormente, se separan las bolitas y desechos celulares y serecupera el sobrenadante.

Sonificación:
Se utilizan frecuencias de 20 Khz esto produce vibraciones que provocan el fenómeno de cavitación.
• Se producen zonas de baja presión en el líquido
• El líquido se transforma en gas formándose pequeñas burbujas
• Las burbujas colapsan debido a los cambios de presión.
• Se producen fuertes esfuerzos de corte en el líquido que rompen las células.Homogenizador por cuchilla: La idea es generar altos esfuerzos de corte que produzcan la ruptura de las células. Los altos esfuerzos de corte se pueden obtener por cuchillas.

Homogenizador por presión: Las células se rompen cuando la suspensión pasa a alta presión
por una válvula de descarga. Las células son sometidas a:
• Turbulencia
• Cavitación
• Fuertes esfuerzos de corte por mediode cuchillas.
Parámetros de diseño: a) presión de operación a mayor presión, mayor liberación de proteínas, b) válvula en forma de cuchillas que provoca turbulencia lo que implica mayor rompimiento, d) temperatura mientras sea mayor la viscosidad lo cual es positiva para desnaturalizar el producto y aumente el número de proteínas.

b) No mécanicos:
Shock osmótico:
1. Las células secolocan en una volumen de agua 2 veces mayor que el volumen de células.
2. Bajo estas condiciones las células se hinchan, debido a un simple flujo osmótico que se produce debido a que las células contienen solutos (los causantes del flujo osmótico de agua al interior de la célula).
3. Las células se hinchan y algunas llegan a reventarse.
La susceptibilidad de las células es relativa y dependefuertemente de su tipo.
Congelamiento:
Requiere de periodos prolongados de tiempo (hasta 36 horas) para el congelamiento y descongelamiento. El líquido al congelarse a -56° C forma cristales muy finos que rompen la célula cuando esta se descongela rápidamente a 37°C. Tejidos animales y vegetales y masas microbianas pueden congelarse con nitrógeno líquido y molerlos en mortero común. Aparato...