Valoración De La Actividad Acetilcolinesterasa

VALORACIÓN IN VITRO DE FÁRMACOS INHIBIDORES DE LA ENZIMA
ACETILCOLINESTERASA
1
1.. Fundam ento teórico.
Elneurotransm isor en l sinapsis efectoras delsistem a nervioso parasim pático y en l
as
as
sinapsis gangl
ionares delsistem a nervioso sim pático y parasim pático es l acetil ina.
a
col
La acetil ina de l term inaciones col
col
as
inérgicas es sintetizada en elcitopl a neuronalasm
a partir de l col y de l acetil
a ina
a
coenzim a A (
Ac-CoA) m ediante l acción de l enzim a
a
a
col
inoacetil
transferasa (
ChAcT). Una vez l
iberada al espacio intersináptico, l acetil ina
a
col
puede seguir tres destinos diferentes: a) ser hidrol
izada en l propia hendidura sináptica por
a
l enzim a acetil inesterasa (
a
col
AchE); b) difundir fuera de l hendidurasináptica y ser
a
hidrol
izada por l butiril inesterasa (
a
col
BuchE) o c) interactuar con sus receptores (
nicotí
nicos
y m uscarí
nicos) para ej
ercer l acciones especí
as
ficas en cada órgano.
La biosí
ntesis y m etabol o de l acetil ina queda resum ido en l siguiente figura:
ism
a
col
a

Colinoacetil
transferasa

Colina
+
Ac-CoA

Acetilcolina

Colina

Acetilcolinaaaa

Acetilcolinesterasa

Acetato

Si bien l acetil ina puede hidrol
a
col
izarse espontáneam ente, este proceso es 100 m ilones
l
de veces m ás rápido con enzim as col
inesterásicas. Existen dos tipos de enzim as
col
inesterasas: l AChE, que al
a
canza una gran concentración en l m em brana postsináptica,
a
y l BuChE m uy abundante en hí
a
gado y pl a, pero virtual enteinexistente en neuronas.
asm
m
Respecto a l AChE, es una serina hidrol cuyo papel biol
a
asa
ógico es l term inación del
a
im pul nervioso en l sinapsis col
so
as
inérgicas gracias a l rápida hidról
a
isis del
neurotransm isor acetil ina en col y ácido acético.
col
ina
Los inhibidores de esta enzim a ej
ercen su m ecanism o de acción inhibiendo l actividad
a
acetil inesterasa anivelde l sinapsis col
col
a
inérgica y, con elo, aum entando l disponibil
l
a
idad
de acetil ina. Sus acciones farm acol
col
ógicas derivan l propiedad fundam ental de inhibir l
a
a
inactivación de l acetil ina en l sitios donde ésta se l
a
col
os
ibere fisiol
ógicam ente, tanto en el
Sistem a Nervioso Central com o en l term inaciones nerviosas periféricas, som áticas o
asvegetativas. Al
gunos, com o l gal
a antam ina, parecen tam bién fij
arse a un l
ugar al
ostérico del
receptor nicotí
nico de acetil ina, aum entando su efecto. La capacidad de cada com puesto
col
dependerá, entre otros factores, de su capacidad de atravesar m em branas, com o l barrera
a
hem atoencefál y de su capacidad de activar directam ente receptores nicotí
ica
nicos, tanto engangl com o en órganos efectores ( ., pl m otriz delm úscul esquel
ios
p.ej aca
o
ético).
Entre l indicaciones terapéuticas de l inhibidores de l acetil inesterasa están el
as
os
a
col
tratam iento de l m iastenia gravis, gl
a
aucom a, atoní de m úscul l y enferm edad de
a
o iso,
Al
zheim er.

etivos.
2. O bj
1
icaciones de l determ inación de l actividad de l enzim a
a
a
a1.. Conocer elfundam ento y apl
acetil inesterasa en corteza frontalde rata m ediante eluso de una técnica de col etrí
col
orim
a.
orar l actividad farm acol
a
ógica in vitro de un fárm aco, en este caso de rivastigm ina
2. Val
y neostigm ina y com parar sus efectos.
3
ara
a evancia clnica y de l rica inform ación que proporcionan
í
a
3.. Adquirir una idea cl de l rel
l datosobtenidos a partir de experim entos in vitro.
os

3
3.. M aterial
.

-

Pipetas ( m l y m icropipetas (
1)
10-100 µl 100-1000 µl
;
)

-

Tubos de 5 m l

-

Espectrofotóm etro

-

Cubetas

-

Baño term ostático

4. Reactivos.
-

Rivastigm ina

-

Neostigm ina

-

A cetil
tiocol yodada ( m M )
ina
0,3

-

Sodium docecylsul
phate (
SDS) 3%

-

5,5´...