Cinetica enzim tica practica 13




Bioquímica
Laboratorio
Practica 13
Cinética enzimática: efecto del pH y temperatura
Prof. Álvaro torres Durán
Alumno
Oscar Abraham Reyes Olivas
129168
Mier.- jue- vier.























Cd. Juárez Chihuahua México
6 de febrero del 2015
Cinética enzimática: efecto del pH y temperatura

Objetivos:
El alumno analizará el efecto del pH y de la temperatura sobre la actividad enzimática enuna reacción.
Basado en:
a. Discutirá el efecto sobre el comportamiento catalítico de una enzima al variar el pH de la mezcla de reacción.
b. Discutirá los cambios que se presentan en la cinética enzimática al variar la temperatura de reacción.
c. Determinará las condiciones óptimas de reacción en función de estos dos factores (pH, temperatura).

Pre-requisitos:
1. Describir el efecto del pH sobrela estabilidad y actividad de una enzima.
La actividad enzimática guarda también relación con el estado iónico de la molécula y, especialmente, de la parte proteica, puesto que las cadenas poli-peptídicas contienen grupos que pueden ionizarse (principalmente grupos carboxilos y aminos de los aminoácidos constituyentes) en un grado que depende del pH existente. Como ocurre con las proteínas, lasenzimas poseen un punto isoeléctrico al cual su carga libre neta es cero. El pH del punto isoeléctrico, como regla, no es igual al pH al cual se observa actividad máxima. El pH óptimo de las enzimas varía ampliamente; la pepsina, que existe en el medio ácido del estómago, tiene un pH óptimo de alrededor de 1,5, mientras que la arginasa tiene un pH óptimo de 9,7. Sin embargo, la gran mayoría de lasenzimas tienen un óptimo entre pH 4 y 8. Algunas enzimas muestran una amplia tolerancia a los cambios del pH, pero otras trabajan bien sólo en un rango estrecho. Cualquier enzima que se someta a valores extremos de pH, se desnaturaliza. Esta sensibilidad de las enzimas a la alteración del pH es una de las razones por la que la regulación del pH del organismo es controlada celosamente y explica porqué las desviaciones de la normalidad pueden implicar graves consecuencias.
Muchas enzimas existen en el organismo a un pH más bien alejado de su valor óptimo. Esto se debe, en parte, a la diferencia del medio ambiente "in vivo" con respecto al "in vitro". Esto recalca también que el control, del pH puede representar un importante medio para regular la actividad enzimática.
Las proteínas sufrencambios en su solubilidad, presión osmótica y viscosidad a diferentes valores de pH. Es probable que el cambio en la actividad enzimática, al variar los valores de pH, se deba a los cambios en la ionización ya sea de la enzima, del substrato o del complejo enzima-substrato.
A1 determinar la velocidad de reacción de una enzima y para cierta concentración de substrato, a diferentes valores de pH, seobserva que la curva resultante tiene forma de campana. Se le denomina curva de pH: actividad. Esta curva no caracteriza, necesariamente, a una enzima, puesta que el pH óptimo puede variar para diferentes substratos, ni tampoco son similares las curvas de pH: actividad para dos enzimas que hidrolizan el mismo enlace en un substrato. Por ejemplo, las pectino-metilesterasas hidrolizan específicamentelos enlaces éster de poli-metilgalacturonatos. La pectino-metilesterasa obtenida de un hongo tiene un pH óptimo de 5,0; la de fréjoles tiene su óptima actividad a pH cercano a 8,5.
Estas diferencias sobre los pH óptimos de enzimas que actúan sobre substratos similares es de la mayor importancia en el procesamiento de alimentos. Una enzima tiene que tener buena actividad proteolítica a un pH de4,5 a fin de ser una enzima a prueba de congelación, o a niveles de pH superiores a 5,5 para ser un buen ablandador de carne. Para la mayoría de las aplicaciones prácticas, el pH del alimento no puede ser ajustado como para adecuarlo al pH óptimo de una enzima determinada. La enzima debe escogerse en base a su actividad al pH natural del alimento. Existen algunas excepciones notables en que es...