Cuantificacion de proteinas

FACULTAD CIENCIAS SILVOAGROPECUARIAS
AÑO 2010 PRIMER SEMESTRE LABORATORIO ASIGNATURA DE BIOQUÍMICA. PLAN COMÚN AGRONOMÍA E INGENIERÍA FORESTAL

TRABAJO PRÁCTICO Nº 2 CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD. INTRODUCCIÓN La palabra “Proteína” fue propuesta por Jöns Berzelius en 1838, proveniente del griego Proteios que significa “lo primero, de primera clase”, para aludir a untipo de biomoléculas (mayor a 10.000 dalton) de enorme importancia en los tejidos vegetales y animales. Las proteínas están formadas por secuencias de aminoácidos unidos por enlaces químicos que los mantienen unidos. Esta unión entre aminoácidos se conoce como enlace peptídico, de ahí que las cadenas de aminoácidos que constituyen una proteína se denominen cadenas polipeptídicas. El enlace peptídicotiene lugar mediante la pérdida de una molécula de agua entre el grupo amino de un aminoácido y el carboxilo de otro:

Figura 1.- Formación del enlace péptidico. El resultado es un enlace covalente CO-NH. Es, en realidad, un enlace amida sustituido. Podemos seguir añadiendo aminoácidos al péptido, porque siempre hay un extremo NH2 terminal y un COOH terminal. El grado de organización estructuralde las proteínas es muy complejo e involucran a lo menos cuatro niveles, cada uno de ellos dependiente del que lo precede. Brevemente: 1.- La configuración ó estructura primaria (estructura covalente); determinada por el orden ó secuencia de unión de los aminoácidos. 2.- La configuración ó estructura secundaria; describe el primer grado de plegamiento de la cadena polipeptídica, considerando ladisposición en el espacio sin tomar en cuenta la disposición de las cadenas laterales (R) de los residuos de aminoácidos. 3.- La configuración ó estructura terciaria; descripción del segundo grado de plegamiento de la cadena polipeptídica, otorgándole a la proteína forma tridimensional en el espacio y una superficie exterior característica. Está condicionada por la configuración secundaria y lanaturaleza de las cadenas laterales de los residuos de aminoácidos (α hélice, hoja plegada β).

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Diseño y creación : Hans Krautwurst y Jorge Martínez

4.- La configuración ó estructura cuaternaria; reservada a las proteínas que poseen más de una cadena polipeptídica (denominada subunidad) y se refiere al ordenamiento espacial de tales cadenas polipeptídicas y a la naturaleza de sus contactosmutuos.

Figura 2.- Organización en niveles de estructura de las proteínas.

Las propiedades biológicas de las proteínas dependen de la integridad de sus estructuras. Cuando éstas son alteradas, aunque no haya ruptura de los enlaces peptídicos y puentes disulfuro, la proteína pierde sus propiedades funcionales, físicas y químicas que las caracterizan. Este proceso se denominadesnaturalización, y corresponde básicamente, a la perdida parcial o total de su configuración terciaria. Los agentes desnaturalizantes como los ácidos fuertes (clorhídrico, tricloroacético, perclórico.), álcalis fuertes (hidróxido de sodio, potasio.), el calor mantenido por sobre 50 ºC y una serie de agentes químicos más específicos (urea, β-mercaptoetanol, Dodecil sulfato de sodio, etc.) alteran lasconfiguración secundarias y terciarias de las proteínas. Las proteínas desnaturalizadas presentan una menor solubilidad y habitualmente originan un precipitado. 2.- Métodos de Cuantificación El conocimiento del proteoma, conjunto de proteínas de un organismo, ha pasado a ser el reto de la comunidad científica y de las empresas biotecnológicas, una vez que ya se ha completado la secuenciación del genoma devarios organismos incluyendo el genoma humano. El conocimiento de las secuencias de DNA que integran nuestros genes no tiene un gran valor, si no se identifica cual es la función de dichos genes, en su caso, para que proteínas codifiquen. Las investigaciones de las propiedades y funciones de las proteínas a través del uso de técnicas químicas y físicas, han aumentado los conocimientos sobre las...