Manual de Listeria monocytogenes 2008

Manual de Procedimientos

Aislamiento, identificación
y caracterización de
Listeria monocytogenes

2008

AUTORES
Raquel Callejo
Mónica Prieto
Claudia Martínez
Lorena Aguerre
Florencia Rocca
Gisela Martínez

Servicio Bacteriología Especial
Departamento de Bacteriología
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas
A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán”
Centro Regional de Referencia del WHO GlobalSalm Surv
para América del Sur

Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes

CONTENIDO DEL MANUAL
• SECCIÓN

I:

INTRODUCCIÓN

• SECCIÓN

II:

INVESTIGACIÓN DE Listeria monocytogenes EN MUESTRAS CLÍNICAS

• SECCIÓN

III:

IDENTIFICACIÓN DE Listeria monocytogenes

• SECCIÓN

IV:

IDENTIFICACIÓN DE SEROTIPOS DE Listeria monocytogenes POR PCR

• SECCIÓN

V:SEROTIPIFICACIÓN DE Listeria monocytogenes CON ANTISUEROS

• SECCIÓN

VI:

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria

SECCIÓN I
1. INTRODUCCIÓN
El género Listeria está compuesto por bacterias gram positivas con bajo contenido G+C, estrechamente
relacionado con los géneros Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Streptococcus y Staphylococcus.
Son bacilosaerobios o anaerobios facultativos, no esporulados, no capsulados, catalasa positiva, móviles entre 10
y 25ºC (Collins et al., 1991).
Listeria ha sido aislada de diferentes sitios ambientales, como; suelo, agua, efluentes, de una gran variedad de
alimentos y de heces humanas y animales. El habitat natural de estos microorganismos es probablemente la
materia orgánica vegetal en descomposición ylos rumiantes domésticos contribuyen al mantenimientos de
Listeria spp. en el ambiente rural a través de un ciclo continuo de enriquecimiento oral-fecal (Fenlon, 1999).
La amplia distribución de L. monocytogenes se debe a la capacidad de sobrevivir durante períodos de tiempo
prolongados en diferentes medios.
El género Listeria comprende seis especies: L. monocytogenes, L. ivanovii, L. seeligeri, L.innocua, L. welshimeri
y L. grayi. Las dos especies potencialmente patógenas son L. monocytogenes y L. ivanovii.
L. monocytogenes no fue considerado un patógeno animal hasta fines de la década del 70. A principios de los
años 80 emerge como uno de los patógenos humanos de origen alimentario más importante. A partir de ese
momento, la literatura sobre Listeria comenzó a incrementarse y a partir de1983 una serie de brotes epidémicos
humanos en Norteamérica y Europa establecieron claramente a la listeriosis como una grave infección alimentaria
(Bille, 1990). Los alimentos más frecuentemente asociados con brotes y con alto nivel de riesgo son quesos y
productos lácteos, patés y salchichas, pescados ahumados, ensaladas y en general productos industrializados,
refrigerados, listos para elconsumo, sin requerimientos de cocción o calentamiento previo (Farber and Peterkin,
1991). Los alimentos se pueden contaminar en cualquier eslabón de la cadena productiva, así como también en el
almacenamiento en frío.
En la actualidad, se estima que L. monocytogenes es la principal causa de muerte originada por bacterias de
origen alimentario en USA, aproximadamente se registran 2500 casos delisteriosis humana por año, incluyendo
500 muertes (Mead et al., 2006).
En rumiantes, la infección por Listeria es transmitida por consumo de silaje en mal estado, en el cual la bacteria se
multiplica rápidamente, dando lugar a brotes en ganado (Fenlon, 1999).
El genoma de L. monocytogenes fue secuenciado recientemente y posee un cromosoma circular de 2.944.528 pb
con un promedio de G+C de 39%. Se hanidentificado 2853 genes, sin embargo al 35.3% no se les conoce
función. En el caso de L. innocua posee un único cromosoma circular de 3.011.209 pb con un contenido promedio
de G+C del 37%. Dentro del género Listeria, estas dos especies presentan alto grado de homología en la
secuencia del 16S rRNA, siendo las de mayor cercanía taxonómica (Von Both et al., 1999).
1.1 Serovariedades
Existen hasta el...