Reaccion en cadena de la polimerasa
Páginas: 9 (2131 palabras)
Publicado: 21 de noviembre de 2009
INTRODUCCIÓN
La reacción en cadena de la polimerasa, más conocida como PCR, fue desarrollada por Kary Mullis a mediados de los años 80. Es una técnica que permite replicar entre cientos de miles y millones de veces, en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeñas cantidades de ADN.
Uno de los aportes fundamentales de esta metodología a la investigación básica en biología molecularconsiste, precisamente, en la rapidez y eficiencia mediante las cuales se realiza una tarea que antes requería largas y tediosas jornadas. El producto que se obtiene al finalizar la reacción; una gran cantidad de un fragmento génico con alto grado de pureza, favorece la tarea de los investigadores empeñados en ampliar los conocimientos sobre la estructura y función de los genes. Por su altasensibilidad, esta técnica permite identificar un gen a partir de un solo cabello, una célula somática o un espermatozoide.
Los genes son porciones de ácido desoxirribonucleico (ADN) que tienen la información necesaria para la fabricación de los ácidos ribonucleicos (ARN) y, en última instancia, a través de éstos, de las proteínas: el ARN "copia" el mensaje contenido en el ADN y a partir de él da lugar ala correcta formación de la cadena o secuencia de aminoácidos que constituyen las proteínas.
Todos los genes están compuestos por la misma materia prima: una sucesión de nucleótidos. Cada nucleótido está formado por un grupo fosfato, un azúcar con cinco carbonos (la desoxirribosa) y una de las siguientes bases nitrogenadas: adenina, timina, guanina o citosina. Los genes no se distinguen unos deotros por tener una composición fisicoquímica muy diferente, sino por el orden o secuencia en la que estas cuatro bases se disponen a lo largo de la molécula de ADN
Por otra parte, cada gen es una unidad de información sin solución de continuidad respecto del resto del ADN en el que está inmerso. Esto significa que a todo gen lo preceden y suceden otras secuencias de ADN que, en general, no tienenrelación con él
Sus aplicaciones en la Medicina Forense han facilitado, y en muchos casos hecho posible, la tarea de identificación de personas, por ejemplo de hijos de desaparecidos, mediante el análisis de muestras del niño y de su abuela materna. Entre las aplicaciones médicas de la PCR cabe destacar su aporte al desarrollo de nuevas estrategias de diagnóstico. Permite detectar agentesinfecciosos como los virus de las hepatitis B y C o regiones del genoma del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). Además ha sido aplicada, por ejemplo, para diagnosticar la presencia o ausencia de HIV en recién nacidos de madres seropositivas, pues la existencia de anticuerpos maternos impide obtener resultados confiables, con los métodos convencionales, durante el primer año de vida. También hafacilitado el diagnóstico de enfermedades tales como las hemofilias A y B, la distrofia muscular y la fibrosis quística, e hizo posible reconocer mutaciones de genes vinculadas con enfermedades oncológicas. Su sensibilidad permite detectar poblaciones residuales de células cancerosas en pacientes sometidos a quimioterapia y de este modo se ha podido determinar, con antelación, un nuevo avance dela enfermedad.
Objetivos:
▪ Conocer la importancia de la PCR
▪ Conocer la teoría y la aplicación de la técnica de la PCR.
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
¿Qué son las Polimerasas?
Las polimerasas son enzimas capaces de sintetizar DNA o RNA "in Vitro". La mayoría de estas enzimas requieren un molde y sintetizan una molécula complementaria al molde. Laspolimerasas utilizadas con mayor frecuencia son:
• DNA polimerasa I de E. Coli
• El fragmento de Klenow
• Transcriptasa inversa: utiliza como molde RNA para convertirlo en DNA
• La DNA polimerasa del bacteriofago T7
• RNA polimerasa de los bacteriofagos SP6, T7 y T3
• La Taq polimerasa.
La mayoría de las polimerasas necesitan un pequeño cebador o primer complementario...
La reacción en cadena de la polimerasa, más conocida como PCR, fue desarrollada por Kary Mullis a mediados de los años 80. Es una técnica que permite replicar entre cientos de miles y millones de veces, en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeñas cantidades de ADN.
Uno de los aportes fundamentales de esta metodología a la investigación básica en biología molecularconsiste, precisamente, en la rapidez y eficiencia mediante las cuales se realiza una tarea que antes requería largas y tediosas jornadas. El producto que se obtiene al finalizar la reacción; una gran cantidad de un fragmento génico con alto grado de pureza, favorece la tarea de los investigadores empeñados en ampliar los conocimientos sobre la estructura y función de los genes. Por su altasensibilidad, esta técnica permite identificar un gen a partir de un solo cabello, una célula somática o un espermatozoide.
Los genes son porciones de ácido desoxirribonucleico (ADN) que tienen la información necesaria para la fabricación de los ácidos ribonucleicos (ARN) y, en última instancia, a través de éstos, de las proteínas: el ARN "copia" el mensaje contenido en el ADN y a partir de él da lugar ala correcta formación de la cadena o secuencia de aminoácidos que constituyen las proteínas.
Todos los genes están compuestos por la misma materia prima: una sucesión de nucleótidos. Cada nucleótido está formado por un grupo fosfato, un azúcar con cinco carbonos (la desoxirribosa) y una de las siguientes bases nitrogenadas: adenina, timina, guanina o citosina. Los genes no se distinguen unos deotros por tener una composición fisicoquímica muy diferente, sino por el orden o secuencia en la que estas cuatro bases se disponen a lo largo de la molécula de ADN
Por otra parte, cada gen es una unidad de información sin solución de continuidad respecto del resto del ADN en el que está inmerso. Esto significa que a todo gen lo preceden y suceden otras secuencias de ADN que, en general, no tienenrelación con él
Sus aplicaciones en la Medicina Forense han facilitado, y en muchos casos hecho posible, la tarea de identificación de personas, por ejemplo de hijos de desaparecidos, mediante el análisis de muestras del niño y de su abuela materna. Entre las aplicaciones médicas de la PCR cabe destacar su aporte al desarrollo de nuevas estrategias de diagnóstico. Permite detectar agentesinfecciosos como los virus de las hepatitis B y C o regiones del genoma del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). Además ha sido aplicada, por ejemplo, para diagnosticar la presencia o ausencia de HIV en recién nacidos de madres seropositivas, pues la existencia de anticuerpos maternos impide obtener resultados confiables, con los métodos convencionales, durante el primer año de vida. También hafacilitado el diagnóstico de enfermedades tales como las hemofilias A y B, la distrofia muscular y la fibrosis quística, e hizo posible reconocer mutaciones de genes vinculadas con enfermedades oncológicas. Su sensibilidad permite detectar poblaciones residuales de células cancerosas en pacientes sometidos a quimioterapia y de este modo se ha podido determinar, con antelación, un nuevo avance dela enfermedad.
Objetivos:
▪ Conocer la importancia de la PCR
▪ Conocer la teoría y la aplicación de la técnica de la PCR.
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
¿Qué son las Polimerasas?
Las polimerasas son enzimas capaces de sintetizar DNA o RNA "in Vitro". La mayoría de estas enzimas requieren un molde y sintetizan una molécula complementaria al molde. Laspolimerasas utilizadas con mayor frecuencia son:
• DNA polimerasa I de E. Coli
• El fragmento de Klenow
• Transcriptasa inversa: utiliza como molde RNA para convertirlo en DNA
• La DNA polimerasa del bacteriofago T7
• RNA polimerasa de los bacteriofagos SP6, T7 y T3
• La Taq polimerasa.
La mayoría de las polimerasas necesitan un pequeño cebador o primer complementario...
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