ACTIVIDAD METABÓLICA: PRODUCCIÓN DE EXOENZIMAS

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS






MICROBIOLOGÍA GENERAL
PRÁCTICA Nº9
ACTIVIDAD METABÓLICA: PRODUCCIÓN DE EXOENZIMAS (CATALASA, AMILASA, UREASA, OXIDASA, COAGULASA, LIPASA, PROTEASA Y HEMOLISINAS).





Luis Eduardo D.
Microbiología General
M.C. Rosalba Villalba Luna

Práctica nº9
Actividad metabólica:producción de exoenzimas (catalasa, amilasa, ureasa, oxidasa, coagulasa, lipasa, proteasa y hemolisinas).
Resultado de aprendizaje:
Utiliza las pruebas de producción de exoenzimas para identificar bacterias Gram negativas y Gram positivas.
Introducción:
Las enzimas son catalizadores biológicos que disminuyen la energía de activación para reacciones bioquímicas y permiten que los pasos metabólicosesenciales ocurran rápidamente, aun a temperaturas bajas. La actividad de estas determina la naturaleza del organismo; las propiedades fisiológicas de un microorganismo están determinadas, por sus capacidades enzimáticas. La presencia o carencia de una enzima en particular constituye una importante base de diferenciación entre microorganismos y es el mejor determinante de la fisiología y ecología delmismo.
-Catalasa: Las CTE de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas están compuestas por moléculas capaces de aceptar y donar electrones según se necesite.
Una molécula acarreadora en la CTE, llamada flavoproteína, pude rodear al siguiente acarreador y transferir electrones directamente al O2. Esta vía alternativa produce dos toxinas celulares muy potentes: peróxido de hidrógeno(H2O2) y el radical superóxido (O2).
Algunas bacterias producen enzimas capaces de detoxificar estos compuestos. La superóxido dismutasa cataliza la conversión de los radicales superóxido a peróxido de hidrógeno. La catalasa convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso. Las bacterias que producen catalasa pueden ser identificadas utilizando peróxido de hidrógeno común. Cuando este seadiciona a un cultivo catalasa positivo, se formarán burbujas de oxígeno. Si no aparecen burbujas el organismo es catalasa negativo. Un ejemplo de catalasa positivo es Staphylococcus aureus, mientras que Enterococcus faecalis es catalasa negativo.
-Amilasa: El almidón es demasiado grande como para atravesar la membrana celular bacteriana; para ser aprovechado por las bacterias, primero debe sercortado en pequeños fragmentos individuales de glucosa. Los organismos que producen y secretan las enzimas extracelulares α- amilasa y oligo-1,6-glucosidasa son capaces de hidrolizar al almidón rompiendo los enlaces glicosidícos entre las subunidades de los azúcares individuales de α-glucosa.
Cuando organismos que producen estas enzimas son cultivados en agar almidón, hidrolizan el almidón delmedio. El reactivo yodo es usado para detectar la presencia o ausencia del almidón alrededor del crecimiento bacteriano. El yodo reacciona con el almidón y produce un color azul. Entonces una hidrólisis microbiana será revelada por la ausencia del color azul en el medio al agregar el reactivo de yodo. Bacillus cereus es amilasa positivo, mientras que Proteus mirabilis, Escherichia coli yStaphylococcus epidermidis son amilasa negativo.
-Ureasa: La urea es un producto de la descarboxilación de ciertos aminoácidos. Puede ser hidrolizada a amoniaco y dióxido de carbono por enzima ureasa. El caldo de urea contiene urea, factores esenciales de crecimiento y rojo de fenol como indicador de pH. La formulación está designada para determinar la capacidad microbiana para convertir urea a amoniacopor medio de cambios de pH. La producción de amoniaco eleva el pH. Cuando el pH llega a 8.4, el rojo de fenol cambia de amarillo a rosa. Un color rosa indica un resultado positivo. Los organismos ureasa negativos pueden cambiar el color del medio a amarillo o no modificarlo. Los microorganismo que poseen enzima ureasa son Proteus spp., Morganella sp. y Providencia sp.Escherichia coli, Salmonella...