Analisis De Curvas De Fusión

Análisis de curvas de fusión de alta resolución (High resolution melt, HRM)

El HRM es una manera simple y rentable de caracterizar la secuencia de productos de amplificación que no requiereprocesamiento posterior a la PCR. La base del análisis HRM es el característico “comportamiento de fusión” de una muestra particular de DNA.

Los termocicladores de PCR en Tiempo Real con capacidad paraanálisis HRM permiten la caracterización precisa de muestras biológicas basados en la longitud de la secuencia, el contenido de GC y/o la heterogeneidad de las secuencias de ADN. Por tanto, cambiossutiles en la secuencia (por ejemplo los A/T SNP de clase IV) pueden ser distinguidos entre muestras (Ver Figura).
El HRM se puede aplicar, pero no está limitado, a los siguientes análisis:
*Detección de variaciones de secuencia de una sola base (e.g. SNPs)
* Descubrimiento de mutaciones
* Mapeo de ADN
* Identificación de posibles genes de predisposición
* Detectarmutaciones somáticas con una sensibilidad de hasta el 3%
* Niveles cuantificados de tejido transformado.
* Análisis de metilación de ADN
* Prevalencia alélica
* Tipaje de HLA paraestudiar compatibilidad
* Identificación de especies
El HRM es posible no sólo gracias a la instrumentación y el software especializados pero también gracias a la introducción de fluorocromos de ADNbcde tercera generación. Los fluorocromos de tercera generación tales como BEBO (TATAA Biocenter) se han usado con éxito en los análisis de HRM. Estos fluorocromos presentan una baja toxicidad en lasreacciones de amplificación y por tanto pueden ser usados a mayores concentraciones para una mayor saturación de las muestras de ADNbc. El fluorocromo BEBO se une al surco menor del ADN de doble cadenay presenta un fuerte aumento de la fluorescencia cuando está unido al ADNbc. No interfiere con la reacción de la PCR. .
  
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Genotipado de SNP con el Quantimix Easy HRM kit

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