Analisis De Proteinas

ANALISIS DE PROTEINAS, DETERMINACION DEL NITR6GENO POR EL METODO DE
KJELDAHL
OBJETIVOS
* Conocer el fundamento del análisis de proteínas por el método de Kjeldahl.
* Calcular el contenido de nitrogeno en proteina cruda proveniente de un alimento.
FUNDAMENTO TEORICO
Las proteínas existen en los alimentos en combinacion fisica o quimica con carbohidratos o lípidos. Las glucoproteinasy las lipoproteinas afectan las propiedades reologicas de las soluciones alimenticias o poseen aplicaciones técnicas como emulsificantes comestibles. El "envejecimiento" de la carne esta relacionado con cambios químicos en las proteinas. Las proteinas naturales puras poseen poco sabor. Durante el proceso de calentamiento (ebullicion, panificacion, asado) las cadenas laterales de aminoacidos sedegradan o interactuan con otros componentes de los alimentos (ejemplo, la lisina con los azucares reductores) para conferir sabores tipicos. El calentamiento excesivo puede, por otro lado, reducir el valor nutritivo.
En 1883 el investigador danes Johann Kjeldahl desarrollo el proceso basico del conocido metodo actual de analisis de proteinas por el metodo Kjeldahl, mas propiamente, para analizarnitrogeno organico. En esta tecnica se digieren las proteinas y otros componentes organicos de los alimentos en una mezcla con acido sulfurico en presencia de catalizadores. El nitrogeno organico total es convertido en sulfate de amonio. La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente en una solucion de acido borico. Los aniones del borato asi formado se titulan con HC1estandarizado, lo cual se convierte en el nitrogeno de la muestra. El resultado del analisis representa el contenido de proteina cruda del alimento ya que el nitrogeno tambien proviene de componentes no proteicos. Este metodo ha sufrido varias modificaciones. Asi, Kjeldahl uso originalmente permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidacion, sin embargo, los resultados no fueronsatisfactorios, de manera que este reactivo se descarto.
En 1885 Wilforth encontro que se podia acelerar la digestion con acido sulfurico ahadiendo algunos catalizadores. Gunning en 1889 sugirio la adicion de sulfato de potasio para elevar el punto de ebullicion de la mezcla de la digestion para acortar la reaccion. Por lo tanto, el procedimiento de esta tecnica es mas correctamente conocido comoMetodo Kjeldahl-Wilforth- Gunning.

1 pipeta de 5 ml.
1 pipeta de 10 ml.
1 frasco gotero de 25 ml.
1 frasco lambar con capacidad de 1 litro.
1 piceta grande con agua destilada.
1 microbureta.
3 cuerpos de ebullicion.
1 par de guantes de asbesto.
1 pinzas largas.
1 embudo de cristal chico o mediano.
EQUIPO
Aparato digestor Kjeldahl (1 para todo el grupo).
1 aparato destilador microKjeldahl (1 por equipo).
REACTIVOS
Verde de bromocresol al 0.1% diluido en alcohol al 95%.
Rojo de metilo al 0.1% diluido en alcohol al 95%.
Acido borico al 2%.
Acido clorhidrico 0.0 IN (solucion valorada).
Hidroxido de sodio al 30%.
Acido sulfurico concentrado.
Mezcla catalizadora para la digestion: 2.5 g de dioxido de selenio + 100 g de sulfate de potasio + 20 g de sulfate de cobrepentahidratado (proporcionada por la coordinacion de laboratorios).
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
DIGESTION
1.- Pese exactamente 0.15g de harina de trigo en un matraz de micro-Kjeldahl cuidando que la muestra no se adhiera a las paredes o al cuello del matraz.
2.- Ahada 2.5 ml. de H2SO4, dos perlas de ebullicion y aproximadamente 1.0 g de mezcla catalizadora.
3.- Someta a digestion la muestra enel aparato de microKjeldahl bajo una campana de extraccion, con el matraz ligeramente inclinado usando baja temperatura al inicio y aumentando el calor a medida que procede la digestion, rotando los matraces de vez en cuando para asegurarse de que se digiera toda la muestra. La digestion terminara cuando el color de la muestra sea azul-verde claro. El proceso tomara aproximadamente 90 minutes....