Aplicación de la ley de lambert y beer

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  • Publicado : 19 de noviembre de 2011
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• OBJETIVOS

1. Observar aplicación directa y útil de la Ley de Lambert y Beer en los métodos espectrofotométricos con uso de un único estándar, particularmente para la cuantificación decreatinina.
2. Ejercitarse en el uso de concepto de Factor de calibración para cálculos de concentraciones en espectrofotometría.

• RESULTADOS

| Blanco | Standar | Muestra |
Absorbancia | 0.0200 |0.308 | 0.051 |
Diferencia | 0 | 0.288 | 0.031 |

Se utilizó una solución stock de creatinina de 100mg%
100mg______________100ml
0.6mg=X____________0.6ml

La solución estándar se preparó enfiola de 100ml
0.6mg______________100ml
0.03mg=X___________5ml

A 5ml de la solución se le agregó 2.5ml de picrato de sodio
0.03mg_____________7.5ml
0.004mg=X__________1ml

La nueva solucióntiene una concentración de 0.004mg/ml
CM/AM = Cst/Ast CM = 0.00043mg/ml

La concentración de creatinina en un tubo de muestra es
0.00043mg__________1ml
0.00315mg=X________7.5ml0.00315mg__________5ml (filtrado)
0.00819mg=X________13ml (filtrado total)

Al filtrar 1mL de sangre se obtuvo 13mL de filtrado, por lo tanto hay 0.00819mg de creatinina por mililitro de sangre.

•CUESTIONARIO

1. Una disolución aislada de E. coli da una absorbancia de 0.7930 a 260nm en una celda de 1cm a pH 4.5 si el E1%1cm es 197. Calcular la concentración en mg/ml.

A=abc 0.7930=197x1xcc=0.00403mg/ml

2. Calcule el coeficiente de extinción molar a 361nm para la acuocobalamina en tampón fosfato 0.1M a pH 7.0 a partir de los siguientes datos obtenidos en una celda de 1cm.
Solución |Conc. x 10-5M | Io | I |
A | 2.23 | 93.1 | 27.4 |
B | 1.90 | 94.2 | 32.8 |
Nota.- Halle el coeficiente de extinción molar para cada solución y luego el promedio de estos valores.

Solución ALog(Io/I) = E361xbxc log(93.1/27.4) = E361x1x2.23x10-5 E361 = 2.3820x104cm-1M-1

Solución B
Log(Io/I) = E361xbxc log(94.2/32.8) = E361x1x1.90x10-5 E361 = 2.4114x104cm-1M-1

Promedio
E361 =...
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