Aplicación De Técnicas Parasitológicas y Moleculares Para La Detección De Trypanosoma Vivax En Ovinos Infectados Experimentalmente.

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOLOGÍA
LABORATORIO AVANZADO EN BIOLOGÍA CELULAR

Aplicación de técnicas parasitológicas y moleculares para la detección de Trypanosoma vivax en ovinos infectados experimentalmente.

Prof. Vincenza Cerviño
Migdelys Alejos
C.I: 18.325.938

Caracas, 17 de Enero de 2011

-------------------------------------------------INTRODUCCIÓN
Uno de los principales problemas epidemiológicos y de producción animal que existe en muchos países tropicales y subtropicales de Asia, África, Centro y Sur América (Figura 1), es la Tripanosomosis. La tripanosomosis es una enfermedad debilitante y comúnmente fatal en los animales domésticos, especialmente en bovinos y pequeños rumiantes de diferentes edades, sexos y razas,producida por varias especies del género Trypanosoma (protozoarios unicelulares eucariotas).
En Venezuela, el Trypanosoma vivax fue reportado por primera vez en 1920 por Enrique Tejera, quien lo observó en bovinos y lo describió morfológica y biológicamente (Kubes, 1944; Shaw y Lainson, 1972).
Se ha sugerido que la tripanosomosis bovina y ovina en Venezuela es de carácter endémico, con apariciónesporádica de brotes, teniendo una elevada prevalencia con alta morbilidad y mortalidad en regiones ganaderas, donde se ha requerido la aplicación de drogas curativas y preventivas como únicos recursos disponibles en la lucha contra esta enfermedad (Toro, 1990; Rivera y col., 1996; Tamasauka y col., 2006).
Existen diversas técnicas asociadas a la observación del T. vivax en sangre o a ladetección del ADN del mismo. Entre estas se encuentran técnicas como las parasitológicas Woo o centrifugación de microhematocrito y moleculares como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), PCR-RFLP y LAMP. En Venezuela actualmente, se emplean estas metodologías para el diagnóstico de tripanosomosis causada por T. vivax. La microscopia ha sido tradicionalmente utilizada en la identificación de esteagente (Woo 1971; Murray y col., 1977). El diagnóstico parasitológico está basado en la detección microscópica de parásitos en muestras de sangre fresca (Desquesnes y col., 2002), mediante técnicas como centrifugación de microhematocrito (HCT) (Woo, 1969). Esta técnica se basa en la centrifugación en tubos capilares de muestras de sangre fresca de ovinos en estudio y posterior observación de lacapa blanca. Sin embargo, las técnicas parasitológicas son poco sensibles en la fase crónica de la enfermedad debido a la baja concentración de parásitos en sangre de animales infectados durante este estadio por lo que el empleo de estas técnicas es limitado al momento de examinar la prevalencia de tripanosomosis en condiciones de campo (Nantulya 1990).
Debido las limitaciones del diagnósticoparasitológico se ha requerido el desarrollo de técnicas de diagnóstico alternativas para la detección de este agente patógeno, entre ellas se encuentra la técnica PCR ideada por Kary Mullis, la cual está basada en la amplificación de secuencias de ácidos nucleicos específicas empleando una DNA polimerasa, deoxinucleótidos, buffer apropiado y marcadores moleculares especie-específicos. Estametodología se ha aplicado para la identificación precisa de T. vivax y otros tripanosomas empleando marcadores moleculares especie-específicos localizados en el genoma de este parásito hemotrópico (Masiga y col., 1992; Masake y col., 1997; Almeida y col., 1997; Nijiru y col., 2005). Se ha asociado la PCR además con ensayos de digestión enzimática basados en la generación de los fragmentos de restricción(PCR-RFLP) identificando polimorfismos genéticos y evaluando la variabilidad intraespecífica entre los aislados de T. vivax (García y col., 2009). Estas técnicas son altamente sensibles y específicas, pero difíciles de realizar bajo condiciones de campo donde se requiere un método de diagnóstico rápido y efectivo de animales infectados con T. vivax debido al requerimiento de personal capacitado...