biología molecular






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MATERIALES Y MÉTODOS

Se realizaron dos tinciones, para diferenciar las células eucariotas de las procariotas, la primera con un colorante básico, acetorceina, y la segunda con el colorante de Giemsa, para ello se utilizaron una cepa de E. coli que fue proporcionada por el laboratorio y la capa deuna cebolla que se llevó de casa.
Para ambos casos (E. coli y cebolla) se realizaron las dos tinciones, en ambas se hizo el mismo procedimiento, primero se agregó una gota de etanol al 70% en un portaobjetos para hacer el frotis con las células, se dejó secar para que se fijara el frotis, una vez fijado se le agrego ácido clorhídrico al 1N que se dejó actuar por tres minutos, una vez transcurridoese tiempo de escurrió en una caja petri y sin enjuagar se le agrego el colorante (acetorceina o Giemsa) que estaba al 30% y se dejó actuar por cinco minutos, para lo cual se metieron en una estufa de incubación a 60°C, una vez cumplidos los cinco minutos se dejó enfriar y se retiró el colorante en la caja petri, se enjuago gota a gota con agua corriente que en este caso fue agua de la tarja, seretiró el exceso de agua, se cubrió con cubreobjetos y se observó al microscopio a 20X, 40X y 100X



RESULTADOS
Tabla N° 1: Tinciones en muestra de cebolla y cepa bacteriana con el colorante de giemsa y acertoceina.
Células
Tinción
Observación
Cebolla
Giemsa
Debido al tamaño de la célula se pudo observar claramente el núcleo, y el resto se tiño ligeramente rosa.
E. coli
GiemsaLa cantidad de bacterias era alta, pero a pesar de ello se pudo ver la coloración de los bacilos, se tiñeron en su totalidad.
Cebolla
Acetorceina
De igual forma se pudo observar el núcleo de las células, debido al tamaño de estas.
E. coli
Acetorceina
Hubo un ligero cambio de color en el centro de la bacteria.



ANALISIS DE RESULTADOS
Tinción con acetorceina y Giemsa (célulaseucariotas y procariotas)
Se observaron a través de una tinción con el uso de acetorceina células eucariotas en la epidermis de la cebolla, en donde se pudo apreciar sus diferentes fases celulares. En este caso se observó la fase de la mitosis celular de la cebolla, la tinción realizada en esta célula no nos permitió apreciar el citoplasma de la misma. Al realizar la segunda tinción de las célulasde cebolla con Giemsa, se logró identificar las células eucariotas en sus fases celulares, se presentaron de igual forma algunos cromosomas y sobretodo su núcleo celular este último característico de las células eucariotas, comprobando que estas pertenecen a las células vegetales (eucariotas) a diferencia de las procariotas que no tienen núcleo celular.
Se tomó una muestra de una colonia aisladade bacterias E.coli para realizar la tinción con acetorceina. En esta tinción se apreció la fase en el que esta célula procariota realiza su replicación llamada fisión binaria. De la misma forma se tomó una muestra de una colonia aislada de bacterias E.coli para realizar la tinción con Giemsa. Al observarse en el microscopio se encontraron células procariotas debido a que no presentaban núcleocelular
DISCUSION DE RESULTADOS
 Tinción con acetorceina y Giemsa (células eucariotas y procariotas)
Según la Dra. Emma Herrera docente de la Universidad Nacional de Venezuela nos dice que la tinción con acetorceina es una tinción de tipo simple debido a que se utiliza únicamente para ver las formas y estructuras celulares básicas. (Herrera, 2007). Es por ello que identificamos que tipo decélula era y en qué fase celular se encontraba que fue en la Mitosis celular. La acetorceina no tiño los cromosomas ni el citoplasma debido a que la acetorceina es un colorante básico, y por lo tanto tiene afinidad por los componentes ácidos. Los cromosomas son ácidos porque están compuestos por ácido desoxirribonucleico y ácidos ribonucleicos y proteínas histonas mayormente, que como su nombre lo...