Citoquimica

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

Docente: Lic. Lineth García
Universitario: Alessandra M. Flores C.
Grupo: Jueves 1030 -1245 (Biología)
Auxiliar: Univ. Alejandro Canaza Jorges
Fecha de entrega: 23/04/10


Práctica # 3
CITOQUÍMICA
1. INTRODUCCIÓN
Es el estudio de la localización de los diferentes constituyentes celulares, sus relaciones estructurales e interacciones.(Dorland, 2006).
El análisis químico revela los constituyentes del protoplasma, nos demuestra el modo de asociación de los componentes químicos para constituir la materia viva. Para realizar el análisis químico del protoplasma se trata a la célula con reactivos mortíferos. Tanto los colorantes como los fijadores sino alterna la composición global determinan cambios físicos-químicos. (Guachalla,2005).
En una reacción citoquímica hay tres pasos fundamentales:
1.- Fijación: para preservar las estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenómenos nocivos para las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular. Existen diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraldehído,formaldehído, etc.
2.- Incubación en el medio de reacción: como consecuencia se liberar unos productos que bien por sí mismos, o al combinarse con otra sustancia presente, dan lugar a un precipitado visible en el lugar de la reacción.
3.- Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma. ( Woessner, 1990).
Métodoscitoquímicos:
-Reacción de Feulgen (con reactivo Schiff): para ADN.
-Reacción de Milon y Sagakuchi: para tirosina y arginina.
-Tetraóxido de Osmio, Sudan III y IV: lípidos.
-Acetona: Enzimas
-Reacción de PAS (reactivo Schiff): para hidratos de carbono.
(Robertis, 1996).
2. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVO GENERAL
• Observar las sustancias químicas más importantes y que forman parte de la estructuracelular.
2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Comprender la naturaleza de los distintos procesos fisiológicos que se observan durante el estudio de las células.
• Diferenciar en un aspecto general la diferencia entre grasas animales y grasas vegetales.
3. MATERIALES
Ídem guía
4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Ídem guía
5. RESULTADOS
5.1 Observación al Microscopio (Observación de Almidon).- Se observo elraspado de la parte central del tubérculo de papa al microscopio, en la tinción con Lugol se observo de formas ovaladas a los amiloplastos, de color violeta. Estas se pueden observar desde color negro a violeta por la cantidad de Lugol que se ponga. Se observo en el interior unas líneas como surcos y un punto en un extremo de este.

ALMIDON

5.2. Observación al microscopio (Grasa Vegetal).- Enesta observación del raspado de maní, se dejo caer gotas de Sudan III, que es a base de algas de color naranja, se observan en forma de diamante alargado de color rojo a anaranjado, pero también puede que sean las gotas de color anaranjado claro, ya que la mayoría de las grasas vegetales son líquidas a temperatura ambiente.
RASPADO DE MANI


5.3. Observación al microscopio (Grasa Animal).-En esta observación se realizó con los cuerpos grasos de un sapo, se procedió a la tinción de Sudan Black, el cual coloreo de negro a los lípidos, ya sabemos que el Sudan Black colorea la mielina, se observa de forma esférica.
Grasa Animal de Sapo

5.4. Observación al microscopio (Peroxidasas).- En esta observación utilizamos extendidos secos de sangre de sapo, al colocar el sulfato de cobrey luego el agua oxigenada se pudo observar una reacción burbujeante donde se encontraba el frotis de sangre. Esta muestra se observa de color rosado, unos puntos más oscuros.
Peroxidasa (enzima oxidante) en sangre de sapo.

5.5. Observación al microscopio (glucógeno).- En esta observación se realizó con un extendido de hígado de animal, primero con Lugol, para después con yoduro de mercurio...