Conteo de virus

Determinación y estudio de bacterias y análisis
de aguas. Titulación de un virus bacteriano
Intentaremos identificar una bacteria problema mediante el estudio de su crecimiento en diferentes medios de cultivo (caldo común, agar inclinado y medio para fermentación de azúcares), sus características morfológicas y estructurales mediante observaciones microscópicas, su capacidad de degradar elH2O2, su resistencia a determinados antibióticos y con una galería API20E comprobaremos su reactividad ante 20 reacciones específicas. También identificaremos las bacterias que contienen unas aguas contaminadas. Experimentaremos una transferencia genética entre bacterias Gram -. Determinaremos el título de un virus bacteriófago lítico, es decir el número de virus vivos presentes en una muestra. Porúltimo, haremos un estudio del crecimiento de un cultivo de E. Coli y el efecto sobre él de unos antibióticos.
Determinación de bacteria problema
Estudios de la bacteria en diferentes medios
En siete tubos con caldo común y otros siete con agar inclinado inoculamos un tipo de bacteria. Seis de ellas son conocidas (que denominaremos colección) y la restante es desconocida, la denominaremosproblema. Tras una serie de ensayos la identificaremos. Las bacterias conocidas son: Escherichia Coli 37 ºC Gram -
Pseudomonas Aeruginosa 37 ºC Gram -
Staphylococcus Aureus 37 ºC Gram +
Micrococcus Luteus 30 ºC Gram +
Nocardia Corallina 30 ºC Gram +
Bacillus Cereum 37 ºC Gram + (forma esporas)
La bacteria problema además será inoculada en una placa de agar común para aislar colonias.
Cada bacteriala inoculamos en tres tubos con azúcares diferentes para ver sus capacidades de fermentación.
Tras incubar 24 horas comprobamos que en el caldo de cultivo nuestra bacteria problema se asemeja a la Pseudomonas Aeruginosa (P.A.), ya que el tubo presenta tubidez sin precipitado.
En el agar inclinado se sigue pareciendo a la P.A., pues no presenta colonias y además las bacterias son transparentes,sin brillo y con el borde liso.
En las fermentaciones comprobamos que la bacteria problema no se parece a ninguna, aunque presenta cierta similitud con Bacillus Cereum en galactosa y con E. Coli en lactosa.
Tras incubar 48 horas los resultados siguen siendo los mismos en el caldo común y en el agar inclinado, se asemeja a la P.A.; en lactosa a la E. Coli y en galactosa a la B. Cereum.
TécnicasMedios de cultivo: va a ser el medio que permite el crecimiento bacteriano; dependiendo de su composición pueden ser naturales o químicos. El más usado es el caldo común y el agar, aunque existen diversos tipos:
- Caldo común: composición por litro
Extracto de carne 3 g
Peptona bacteriológica 10 g
Cloruro sódico 5 g
pH 7.2 - 7.4. Es un medio líquido.
-Agar nutritivo: su composición es lamisma a la del caldo común y además
contiene 15 g de agar por litro. Es un medio sólido.
-Medios para la fermentación de azúcares: de igual composición a la del cal-
do común pero con menos aminoácidos (extracto de carne 1 g). Tie-
ne un pH 7. Se le añade púrpura de bromocresol, el cual es un indica-
dor de pH que vira a amarillo por debajo de pH 5.2 (producción de
alcoholes). Usaremos tresmedios con diferentes azúcares: uno con
10 g de glucosa, otro de lactosa y un último de sacarosa. En cada uno
introducimos una campana Durham para detectar los gases de fermen-
tación.
Conclusiones
La bacteria problema no se parece a ninguna de las seis conocidas, ya que tras la incubación en los diferentes medios no coincide con los resultados de ninguna bacteria en concreto. Coincide conalguna en unos medios, pero no en todos. Lo que observamos en los medios de fermentación de nuestra bacteria problema fue una alta presencia de gas en glucosa y sacarosa, y baja en lactosa. Y viraba a color amarillo en los tres medios, indicando presencia de ácido.
Observación microscópica
La única forma de ver bacterias al microscopio óptico es incrementando su contraste con respecto al medio....